Флуоресцентни багрила

Производните на флуоресцеин са най-често срещаните флуоресцентни етикети, въведени в олигонуклеотидите. Карбоксифлуоресцеинът има доста голям моларен коефициент на абсорбция и висок квантов добив. В допълнение, максималното възбуждане за производни на флуоресцеина е в спектралния диапазон на аргонови (488 nm) и Nd: YAG (477 nm) лазери, което прави това багрило незаменим в области като:

• ДНК анализ с лазерно индуцирана флуоресцентна детекция;
• конфокална лазерна сканираща микроскопия;
• поточна цитометрия.

При работа с флуоресцеинови производни и техните конюгати обаче трябва да се има предвид следното:

• относително висока степен на избледняване;
• pH-чувствителна флуоресценция (pKa

6.4), което намалява значително при рН под 7.0;

относително широк флуоресцентен спектър, ограничаващ използването на флуоресцеинови производни в някои приложения, включващи използването на няколко флуоресцентни багрила едновременно;

възможно намаляване на интензивността на флуоресценцията в конюгати с биополимери, особено при многократно заместване.

Багрилата от серията родамин са намерили широко приложение като олигонуклеотидни етикети. За разлика от производни на флуоресцеините, техните спектрални характеристики не се променят в диапазона на рН от 4 до 10. Карбоксиродамин R6G е подобен по спектрални характеристики на 6-JOE. Карбоксиродамините се използват в различни молекулярно-биологични приложения като:

• автоматично секвениране на ДНК;
• количествена PCR в реално време;
• флуоресцентна in situ хибридизация;
• откриване на ДНК чипове.

Области на употреба:

Багрилата от серията родамин са намерили широко приложение като олигонуклеотидни етикети. За разлика от флуоресцеиновите производни, техните спектрални характеристики не се променят в диапазона на рН от 4 до 10. В момента карбокси-Х-родаминът е едно от най-използваните флуоресцентни багрила от серията родамин. Карбокси-Х-родаминът се използва в различни молекулярно-биологични приложения като:

---