Блокирането на активността на tlr2 намалява и стабилизира напредналите атеросклеротични лезии в

активността

  • Резюме
  • Цел:
  • Методите:
  • Резултати:
  • Заключение:
  • Въведение
  • материали и методи
  • Животни и експериментален дизайн
  • Събиране и обработка на тъкани
  • Биохимичен анализ
  • Хистологично и имунохистохимично оцветяване
  • Тестване in situ от dUTP-медиирано никед маркиране от ToT
  • Уестърн петна
  • статистически анализи
  • Резултати
  • Блокирането на активността на TLR2 намалява и стабилизира атеросклеротичните лезии на брахиоцефалната артерия
  • TLR2 блокадата облекчава възпалението на атеросклеротичните артерии
  • TLR2 блокадата намалява апоптозата на макрофагите и експресията на CHOP при напреднали атеросклеротични лезии
  • TLR2 участва в ускореното формиране на атеросклероза и регулира експресията на CHOP и апоптозата при мишки с дефицит на ApoE, получаващи HC диети.
  • Дискусия
  • Принос на автора

Резюме

Цел:

Сигнализирането за подобен на рецептор 2 (TLR2) играе съществена роля в инициирането на атеросклероза. Целта на това проучване е да се изследва дали блокирането на активността на TLR2 може да има терапевтични ефекти върху напреднала атеросклероза.

Методите:

Четиридесетседмични аполипопротеинови Е-дефицитни (ApoE -/-) мишки, хранени с нормална диета, се инжектират интравенозно с неутрализиращо антитяло TLR2 или с изотип съвпадащ IgG в продължение на 18 седмици. Двойните нокаутиращи ApoE мишки - Tlr2 -/- бяха взети като положителна контрола. В края на леченията се измерват плазмените нива на липидите и се анализира морфологията на плаката, експресията на провъзпалителни цитокини и апоптозата в артериите. Във втората част на това проучване 6-седмични мишки ApoE -/- и ApoE -/- Tlr2 -/-, хранени с диета за понижаване на холестерола в продължение на 12 до 24 седмици, демонстрираха нива на експресия на TLR2 и маркери. артериите. разгледани.

Резултати:

Блокирането на активността на TLR2 с неутрализиращото антитяло TLR2 или инактивирането на гена Tlr2 не променя нивата на плазмените липиди при ApoE -/- мишки. Генетичните и фармакологични манипулации обаче драстично намаляват размера на плаката и стенозата на съдовете, както и стабилността на плаките в брахицефалните артерии. Защитните ефекти на антагонизма на TLR2 са свързани с потискане на експресията на провъзпалителни цитокини IL-6 и TNF-α и инактивиране на транскрипционни фактори NF-KB и Stat3. В допълнение, блокирането на активността на TLR2 намалява индуцираната от стреса апоптоза на макрофагите на брахиоцефалните артерии, което може да допринесе за разрешаване на некротичните ядра при напреднала атеросклероза. В допълнение, диетата с висок холестерол по-значително ускорява образуването на атеросклероза и увеличава експресията на про-апоптотичния протеин CHOP и апоптозата при ApoE -/- мишки в сравнение с ApoE -/- Tlr2 - мишки./- .

Заключение:

Фармакологичната или генетична блокада на активността на TLR2 намалява и стабилизира напреднали атеросклеротични лезии при ApoE -/- мишки. По този начин насочването на сигнали за TLR2 може да бъде обещаваща терапевтична стратегия срещу напреднала атеросклероза.

Въведение

Атеросклерозата е често срещана причина за сърдечно-съдови заболявания. Сърдечно-съдовите заболявания са водещата причина за смърт и представляват нарастваща заплаха за човешкото здраве в световен мащаб 1. Епидемиологичните и експериментални проучвания установяват преобладаващата роля на възпалението във всички стадии на атеросклероза, от образуването на ранни стабилни атеросклеротични плаки до напреднали плаки, които са склонни да се разкъсват 2, 3, 4, 5. Наскоро няколко проучвания изследват ефектите на фармакологичните интервенции върху стабилността на напреднали плаки, тъй като нарушаването на нестабилните лезии допринася за острия коронарен синдром 4, 6, 7. Нестабилните плаки се характеризират с големи некротични ядра, пълни с липиди, капсулирани от тънка влакнеста капачка, високи нива на противовъзпалителни медиатори и матрични протеази и апоптоза. Развитието на нестабилни плаки е свързано с участието на вродената и адаптивна имунна система.

Toll-подобни рецептори (TLR) са семейство рецептори за разпознаване на модели, които играят ключова роля за вродения имунитет и инициират възпалителни реакции. Лигирането на тези рецептори инициира активиране на ядрен фактор-KB (NF-KB), което води до експресията на широк спектър от възпалителни гени 8, 9. Сред характеризираните TLRs, TLR2 е уникален поради способността си да хетеродимеризира с TLR1 или TLR6, което води до относително широка лигандна специфичност, включваща както ендогенни, така и екзогенни лиганди 10, 11. Трябва да се отбележи, че всички потенциални ендогенни агонисти на TLR2, включително бигликан, хромозомен протеин с висока подвижност 1 (HMGB1) и окислени липопротеинови компоненти, се намират в атеросклеротични лезии 12, 13, 14. Освен това, сигналният път на TLR2 е свързан със стресовата реакция на ендоплазмения ретикулум (ER). ER стресът може да увеличи експресията на TLR2 in vitro и in vivo, а TLR2 допринася за апоптозата в макрофагите при ER стрес, предизвикан от липид 15. По този начин TLR2 може да бъде потенциална цел за терапевтични интервенции при лечението на атеросклероза.

материали и методи

Животни и експериментален дизайн

Мишките ApoE -/- Tlr2 -/- бяха генерирани от хетерозиготни кръстоски на мишки ApoE -/- (C57BL/6 фон, лаборатория Jackson) и мишки Tlr2 -/- (C57BL/6, лаборатория Jackson). Генотиповете на хомозиготни двойни нокаутиращи или ApoE единични нокаутни мишки бяха потвърдени чрез PCR, както е описано по-рано 18. Всички животни бяха настанени при нормални условия на влажност, стайна температура и цикли на черна светлина, с достъп до вода и храна ad libitum. Изследванията са проведени в съответствие с принципите, установени от Институционалния комитет по етика на защитата и лечението на животните при биомедицински изследвания (Пекин, Китай).

Събиране и обработка на тъкани

След като мишките гладуват в продължение на 4 часа, от ретроорбиталния венозен плексус се взема кръв за измерване на липидите. След това мишките бяха анестезирани с 50 mg/kg ip пентобарбитал и инфузирани в лявата сърдечна камера с фосфатно буфериран физиологичен разтвор под физиологично налягане. Аортите бяха бързо изрязани, незабавно замразени от аортната дъга до бифуркацията на илиата и държани при -80 ° C преди анализ на протеина. Цялата брахиоцефална артерия на всяко животно се фиксира в 4% параформалдехид за 24 h при 4 ° C, вгражда се в парафин и се нарязва последователно (дебелина 5 µm).