Стероиден екран
| Управление: | Професор доктор. Йежи Адамски |
| Институт: | Институт за експериментална генетика, Център Хелмхолц Мюнхен |
| Начална страница: | www.helmholtz-muenchen.de/en/ieg/group-molecular-endocrinology/index.html |
Стероидите контролират процесите на диференциация и пролиферация на клетки и тъкани. По-новите резултати също предполагат роля за метаболизма на стероидите в апоптозата и неврорегенерацията. Дефектите в метаболизма на стероидите допринасят за патогенезата на много мултифакторни заболявания като рак, поликистозни синдроми на яйчниците, костни и хрущялни заболявания или неврологични заболявания. Някои наследствени заболявания също са причинени от нарушения на биосинтеза на стероидния предшественик холестерол, като напр Б. ДЕТСКИ синдром, Chondrodysplasia punctata и синдром на Smith-Lemli-Opitz. Освен това кортикостеронът е важен маркер за стрес и метаболитни нарушения (диабет).
Основната цел на екрана за метаболизма на стероидите е да идентифицира нови животински модели за заболявания, зависими от метаболизма на човека. Търсят се животински модели на диабет, затлъстяване и депресия, за да се разработят нови терапии.
Мутантни линии на мишка с отклоняващ се метаболизъм на стероиди се намират на основния екран. Възрастните мишки се изследват за вариации в плазмените концентрации на стероиди. Кръв се взема ретро-булбарна от анестезирани мишки и плазмата се получава чрез центрофугиране. Ключовите стероиди кортикостерон, тестостерон и андростендион се извличат от плазмата и се определят количествено с помощта на масспектрометрични методи. Мишки с нисък ръст, катаракта, кожни дефекти, малформации на крайниците и нарушена репродуктивна биология или поведение са най-интересните кандидати за екрана, тъй като съответните фенотипове се наблюдават и при човешки заболявания на метаболизма на стероидите.
В нашия анализ ние определяме количествено няколко стероиди (тестостерон, кортикостерон, андростендион) миша плазма едновременно с HPLC-MS/MS метод, който сме потвърдили (Haller et al, 2010).
Фигура 3: HPLC-MS/MS технология в GAC
Като вторичен екран предлагаме количествено определяне на до 186 ендогенни метаболита (аминокиселини, хексози, глицерофосфолипиди, сфингомиелини, ацилкарнитини, биогенни амини) от 10 микролитра миша плазма в метаболомичната платформа на GAC. ELISA анализ за количествено определяне на DHEA в плазмата се предлага при поискване.
Примери за публикувани резултати:
Концентрацията на тестостерон в серума на мъжки мишки Srgap3 -/- е намалена, но не е свързана с морфологичните промени в мутанта (Waltereit et al, 2012).
В мутантната линия на мишки NGFN-Ali18, първият неиндуциран миши модел за псориатичен артрит, дерматит и остеопороза, успяхме да открием намалена концентрация на тестостерон (Abe et al, 2011).
Резултатите от първичния скрининг на линията Cox4 - без промяна в DHEA и тестостерона - бяха публикувани във FASEB (Huttemann et al, 2012).
Променени концентрации на кортикостерон, специфични за генотипа, са открити в линии HMGN1, 3 и 5 на първичния екран. Резултатите са публикувани от Nucleic Acids Research (Kugler et al, 2013).
Резултатите от първичния екран на линията ADAR2 - без промяна в DHEA и тестостерона - са публикувани (Horsch et al, 2011).