Как да определим афлатоксини; Селскостопански сектор
Методи за изпитване
Съществуват редица различни методи за определяне на афлатоксини, повечето от които се предлагат в търговската мрежа.
Широкият набор от опции за тестване ни позволява да изберем най-подходящия метод за измерване за дадените условия.
Въз основа на сложността, осъществимостта и времето, необходимо за процедурите, методите са разделени на две основни категории: бързи методи, референтни методи.
Бързи методи
Бързите методи са от съществено значение за аналитичните резултати, достъпни за кратко време.
Тези процедури позволяват извършването на лесни за изпълнение тестове на по-ниска цена, дори на мястото за вземане на проби.
Ако съдържанието на микотоксин в дадена партида трябва да бъде потвърдено чрез бърз тест, както в случая с референтните методи, първо трябва да се гарантира, че пробата е представителна.
Изпитваното (ите) съединение (я) трябва да се извлече преди да се пристъпи към изпитването на пробата.
За да се определят точните количествени резултати, оценката трябва да се извърши с инструмент за откриване.
Докато тестовете, които дават качествени (да/не) или полуколичествени (разположение на резултата в определени диапазони, например между 0,5 и 1 ppm), резултатите могат да бъдат оценени най-вече визуално,.
Няколко различни технологии могат да се използват в бързи методи, разработени за анализ на афлатоксини.
Най-често срещаните са ензимно-свързан имуносорбентен анализ (ELISA), имунохроматографски тест ленти (LFD) и химични методи.
Техниката ELISA, която включва методи за имуноанализ, използва антитела, специфични за тествания компонент, за да се определят качествено или количествено микотоксините в аналитичната проба.
Резултатите се определят чрез ензимно свързана цветна реакция, при която интензивността на цвета е пропорционална на концентрацията на тествания микотоксин.
ELISA тестовете с конкурентни формати обикновено се използват за откриване на микотоксини, следователно измерената интензивност на цвета е обратно пропорционална на концентрацията на тествания компонент.
Тези ELISA тестови системи осигуряват количествени резултати за кратко време и са отлични скринингови инструменти, които често се използват на мястото за вземане на проби.
Въпреки това, кръстосаните реакции с молекули, много подобни на изпитваното вещество и матричните ефекти, наблюдавани в различни продукти, могат да повлияят на резултатите от теста.
Количественото определяне на всички афлатоксини, афлатоксин В1, общите афлатоксини (В1, В2, G1 и G2), афлатоксин М1 може да се извърши чрез ELISA.
Производителите на тестовете са взели предвид различните прагове в различните региони.
Следователно, въз основа на настоящите изисквания, които трябва да бъдат изпълнени, независимо дали са местни гранични стойности или прагове, които са в сила в страната на дестинация за износ, могат да бъдат избрани тестове с подходяща чувствителност.
Когато се използват ELISA методи, се препоръчва да се провери списъкът с пробни матрици, валидирани от производителя с този комплект.
С ELISA техниката значителна част от селскостопанските суровини могат да бъдат тествани съгласно инструкциите на производителя, без да се използват специални стъпки за почистване.
Въпреки това, ELISA тестването на по-сложни видове проби, като комбиниран фураж, може да доведе до неточни резултати.
За да се избегне това, се препоръчва да се консултирате с производителя на тестовете в светлината на конкретната проба, която ще бъде тествана.
Имунохроматографските тест ленти се появяват като друга приложима технология на пазара за бързи тестове за микотоксини.
Методът се основава на откриване на тествания компонент чрез свързване към специфично антитяло в тестовата зона, което се намира върху мембраната на тест лентата.
В допълнение към тестовата зона, върху мембраната беше установена контролна зона, за да се провери правилната работа на теста.
Когато екстрактът от пробата протича през мембраната, преминава през тестовата и контролната зони, в зависимост от концентрацията на токсина, ще се виждат и двете (тест и контролна) линии, или само контролната линия.
Тестовата лента може да бъде оценена с невъоръжено око, визуално или с помощта на инструмент за четене.
Ако се изискват количествени резултати, оценката се извършва с инструмент (отражателен фотометър), който измерва интензивността на тестовите и контролни линии и след това оценява резултатите въз основа на тях.
Имунохроматографската тест лента е бърза, лесна за изпълнение техника, идеална и рентабилна за тестване дори на една проба и може да се извърши на мястото за вземане на проби.
Както при ELISA техниката, кръстосаните реакции и матричните ефекти по време на тестването на отделни продукти ограничават приложимостта на тест лентата.
Имунохроматографските тест ленти се предлагат както в качествена, така и в количествена форма за определяне на афлатоксини.
Тези тестове са валидирани на по същество прости матрици на проби, т.е. тяхното използване се препоръчва за скрининг на суровини.
Най-честият пример за химични тестове, използвани за определяне на афлатоксини, са флуориметричните системи за изпитване.
След екстракцията компонентите, които пречат на изпитването, трябва да бъдат отстранени от пробата чрез етап на пречистване и след това флуоресцентните свойства на изпитваното вещество трябва да бъдат усилени чрез дериватизация.
Светлината, излъчвана от пречистения аналит при възбуждане, се оценява с флуориметър.
Тази техника обикновено се използва при изследване на афлатоксини, тъй като тази група микотоксини има силни, естествени флуоресцентни свойства.
С такъв количествено измерим, евтин тест могат да се получат резултати за кратко време, дори за проба.
Прилагането на метода обаче е ограничено до компоненти с флуоресцентни свойства и някои продукти показват матрични ефекти, които могат да повлияят на аналитичните резултати.
Флоуриметричните тестове предлагат бърза и надеждна алтернатива за определяне на всички афлатоксини (B1, B2, G1 и G2).
Референтни методи
Ако се тества матрица, която поради своята сложност не е в списъка на веществата, валидирана от производителите на теста, или резултатът от бърз тест трябва да бъде потвърден, пробата трябва да бъде тествана с помощта на референтни методи.
Референтните методи за определяне на афлатоксини се основават на хроматография, включително интензивна течна хроматография (HPLC).
Разликата между методите се дължи на типа детектор, използван след разделяне, а в случай на флуоресцентно откриване - на метода на дериватизация.