Вирусна РНК на хепатит С (количествена) - Synevo

Обща информация и препоръки

Вирусът на хепатит С (HCV), член на семейство Flaviviridae, се предава главно парентерално, като честотата на HCV инфекцията е висока при пациенти с трансплантация на органи или кръвопреливане, при хора с интравенозна злоупотреба с наркотици и при пациенти на бъбречна диализа 1; 2 .

Острите инфекции обикновено са леки или безсимптомни, но прогресирането до хроничен хепатит се среща в 60-90% от случаите.

Характеризирането на генома на HCV и протеините, кодирани от него, позволи разработването както на серологични методи за определяне на специфични антитела, така и на молекулярни тестове за потвърждаване на диагнозата и проследяване на терапията. Наличието на антитела срещу HCV е само индикатор за експозиция на HCV и не може да се счита за маркер за текуща инфекция 1 .

Сред биохимичните маркери за увреждане на черния дроб, нивата на аланин аминотрансфераза (ALT) се считат за важен елемент в решението за извършване на чернодробна биопсия и/или за започване на антивирусна терапия. Степента на повишаване на ALT обаче не може да бъде пряко корелирана с HCV инфекция, тъй като: при пациенти с хроничен хепатит С серумните нива на ALT могат да варират спонтанно, като са възможни продължителни периоди на биохимична ремисия; Нивата на ALT могат да бъдат повлияни от други фактори като консумация на алкохол, свързани лекарства, наличие на други вирусни инфекции, неалкохолна чернодробна стеатоза; има категория пациенти (изчислени на 20-40% от случаите на хронична HCV инфекция), които имат постоянно нормално или дискретно повишено ниво на ALT, при условия на непрекъсната вирусна репликация 3 .

От друга страна, откриването чрез амплификация на нуклеинова киселина с помощта на верижна полимеризационна реакция (PCR) осигурява мярка за вирусна репликация, която е полезна както за диагностициране на активна инфекция, така и за наблюдение на лечението. Новите тестове, които количествено определят вирусното натоварване с помощта на технологията "PCR в реално време", имат по-висока аналитична чувствителност и много по-широк (измерим) диапазон на линейност в сравнение с конвенционалната PCR технология 1; 2 .

По отношение на диагнозата, използвайки метода PCR, е възможно да се открие HCV виремия преди сероимунологично преобразуване 2 .

Определянето на виремия също е полезно за установяване на прогресията на заболяването и оценка на ефикасността на антивирусната терапия, както за класическия режим на лечение, който включва комбинацията от пегилиран интерферонов препарат (PegINFα) с рибавирин, така и за по-нови протоколи, съдържащи лекарства с пряко антивирусно действие 1 .

Събран образец - венозна кръв 2 .

Контейнер за прибиране на реколтата - вакуутан, съдържащ EDTA като антикоагулант 2 .

Количество прибрано - стига вакуумът да позволява 2 .

Причини за отхвърляне да опиташ - използване на хепарин като антикоагулант 2 .

Необходима обработка след прибиране на реколтата - отделете плазмата за максимум 1 ден от събирането чрез центрофугиране при 800-1600 х g в продължение на 20 минути при стайна температура, след това прехвърлете в полипропиленова епруветка (мин. 2 ml плазма) 2 .

Стабилност на пробата - отделената плазма може да се съхранява 72 часа при стайна температура, 7 дни при 2-8 ° C или поне 6 седмици, замразени при -80 ° C. Пробите могат да бъдат замразени/размразени до пет пъти без загуба на HCV 2 РНК .

Метод - PCR в реално време (TaqMan): верижна полимеризационна реакция с откриване в реално време на натрупания PCR продукт, чрез измерване на излъчената флуоресценция.

Забележка: обработката на пробите се извършва автоматично 2 .

Референтни стойности - Неоткриваема HCV-РНК; границата на откриване на метода в линейния диапазон е 15 IU/mL, стойност, която съвпада с аналитичната чувствителност. "Неоткриваем" резултат означава, че това е или много ниска виремия (под количествената граница) или липсваща виремия. Резултат от HCV РНК 2 .

Тълкуване на резултатите

Резултатите от виремия се изразяват както числено (IU/mL), така и в логаритмична форма (log IU/mL). Логаритмичната експресия е полезна за оценка на отговора на лечението. Промяна в 1 log на виремия спрямо изходното ниво показва 10-кратно увеличение или намаляване. Постигането на положителен резултат показва наличието на активна инфекция .

Мониторинг на виремия за класическия антивирусен режим на лечение

PegINFα в комбинация с рибавирин е показан за лечение на хроничен хепатит тип С при възрастни пациенти с HCV-положителна РНК, както и при пациенти с компенсирана чернодробна цироза след вирусна инфекция С.

Целта на антивирусното лечение е устойчив вирусологичен отговор (SVR) определена като неоткриваема HCV-РНК 6 месеца след края на лечението.

Отговорът на антивирусното лечение се влияе от много фактори, вирусологични (HVC генотип, ниво на базална виремия) или свързани с гостоприемника (раса, тежест на чернодробно заболяване, инсулинова резистентност). Заедно с тях има и коригиращи фактори, които се появяват по време на първоначалната терапия, но които могат да се намесят при втория опит за лечение (намаляване на високите дози или дори прекратяване на лечението поради хематологични странични ефекти или депресия; ниско съответствие) 4 .

В зависимост от това кога е настъпил вирусният клирънс, вирусологичният отговор може да попадне в една от следните категории:

- бърз вирусологичен отговор ("RVR"): получаване на неоткриваема HCV-РНК 4 седмици след започване на терапията; пациентите се считат за "бързо реагиращи";

- ранен вирусологичен отговор („Ранен вирусологичен отговор“, EVR) завършен: определя се от неоткриваема виремия 12 седмици след започване на терапията; пациентите се считат за "реагиращи на стандарт";

- бавен вирусологичен отговор ("Бавен вирусологичен отговор") или частично ранен вирусологичен отговор: определя се чрез намаляване на виремията с ≥2 log10 от изходното ниво 12 седмици след началото на лечението и получаване на неоткриваема HCV РНК на 24 седмица; пациентите се считат за „бавно реагиращи“ 3; 4 .

От друга страна, има следните категории, свързани с неуспеха на антивирусната терапия:

- невирусологичен отговор („липса на отговор“): определя се чрез намаляване на виремията с 4 .

Продължителността на комбинираното лечение зависи от вирусния генотип. Според стандартните програми за антивирусна терапия, пациентите, заразени с HCV генотип 1 или генотип 4, независимо от изходната виремия, трябва да получават лечение в продължение на 48 седмици. Многонационални клинични проучвания показват, че при пациенти, инфектирани с генотипове 2 или 3, продължителността на комбинираната терапия може да бъде намалена до 24 седмици, без да се нарушава ефикасността (траен вирусологичен отговор е 84%) 5 .

Данните от проучването INDIV-2 показват възможността за започване на индивидуализирана терапия, ръководена от вирусологичния отговор, при пациенти с генотип 1/4, както следва:

Мониторинг на виремия за протоколи, които включват директно действащи антивирусни средства (терапия без интерферон)

Виремията ще се определи преди началото на терапията, по избор след 2-4 седмици, в края на лечението (след 8, 12, 16 или 24 седмици, в зависимост от терапевтичния режим) и след 12 или 24 седмици след края на лечението 7 .

Хепаринът инхибира PCR, поради което не трябва да се използва като антикоагулант 2 .