SERVALight EosUltra Western Blot Chemiluminescence HRP Substra Kit - PDF Free Download

РЪКОВОДСТВО ЗА ПОТРЕБИТЕЛИ EosUltra Western Blot Chemiluminescence HRP Substra Kit (Cat.-No 42586) SERVA Electrophoresis GmbH Carl-Benz-Str. 7 D-69115 Хайделберг Телефон + 49-6221-138400, Факс + 49-6221-1384010 e-mail: [email protected] http://www.serva.de

blot

Съдържание 1. SERVALIGHT EOSULTRA 2 1.1. Обща информация 2 1.2. Компоненти на комплекта 2 1.3. Условия за съхранение 2 2. ИЗПЪЛНЕНИЕ НА ОТКРИВАНЕТО 3 2.1. Важно в началото 3 2.2. Необходими, не доставени материали и разтвори 4 2.3. Схема за откриване на Western blot 5 2.4. Протокол 5 3. ПРОБЛЕМНИ РЕШЕНИЯ 7 4. ИНФОРМАЦИЯ ЗА ПОРЪЧКА 8 Вер 03/12 1

1. SERVALight EosUltra 1.1. Обща информация SERVALight EosUltra е високочувствителен хемилуминесцентен субстрат за откриване на конюгати от хрян пероксидаза (HRP), напр. белязани антитела върху имуноблоти. Интензивността на сигнала на субстрата позволява откриване на антиген в долния обхват на фемтограмата (10-15). Предимства: Откриване на филми или със системи за документиране, подходящи за хемилуминесценция, напр. ProXima C16Phi +, Isogen Много кратко време на експозиция и/или по-високи разреждания на антитела поради оптимизирани, интензивни светлинни сигнали SERVALight EosUltra не е подходящ за използване в диагностика или други клинични приложения, а само за изследвания и разработки. SERVALight се произвежда от Cyanagen Srl. Cyanagen Srl е предмет на следните патенти на САЩ и ЕС US 7803573, EP 1962095, US 7855287, както и вече подадени и валидни патенти за други страни. 1.2. Компоненти на комплекта кат. SERVALight EosUltra Luminol Solution SERVALight EosUltra Peroxide Solution 42586.01 10 ml 10 ml 42586.02 50 ml 50 ml 42586.03 100 ml 100 ml 1.3. Условия за съхранение Съхранявайте комплекта при 2 8 C. Ако се съхранява при препоръчителната температура, той може да се използва поне до: вижте етикета. 2

2.3. Схема на инкубация за блокиране на електрофореза чрез гел за откриване на петна от Western Block 1. Инкубация на антитела 2. SERVELight EosUltra Detection 2.4. Протокол (1) Отстранете петно ​​от блот апарата и след това го блокирайте при стайна температура (20-60 минути) или при 2-8 ° С за една нощ. (2) Отстранете блокиращия реагент и добавете първия работен разтвор на антитела в подходящо разреждане. Инкубация за 1 h при стайна температура или за една нощ при 2-8 ° С с разклащане. (3) Последващо измиване на мембраната с промивен буфер (5 минути). Повторете стъпката на измиване 4-6 пъти. По-големите буферни обеми или броят на стъпките на измиване могат да помогнат за намаляване на фона. (4) Добавете подходящото разреждане на HRP конюгата. 1 h инкубация на петно ​​при стайна температура с разклащане. (5) Повторете стъпка (3). (6) Преди откриването, разтворите за откриване трябва да са със стайна температура. (7) Пригответе работния разтвор на субстрата чрез смесване на равни пропорции на разтвор на пероксид с разтвор на луминол. Трябва да се използват 0,1 ml работен разтвор на cm 2 мембрана. 5

(8) Работният разтвор е стабилен за 24 часа при стайна температура. (9) 5 минути инкубация на потъналата мембрана с работен разтвор на субстрата. (10) Прехвърлете защитеното петно ​​(напр. Увийте в прозрачно фолио без въздушни мехурчета) във филмовата касета с протеина нагоре и поставете филма. Тук трябва да работите в подходяща тъмна стая. По време на експозицията филмът трябва да остане сух. ВАЖНО: Излишният субстрат трябва да се отстрани от петно. Филмът трябва да се поставя внимателно, тъй като поради интензивността на сигнала дори леко плъзгане на филма/петно ​​може да доведе до замъглени или неправилни сигнали. (11) На първо място се препоръчва време на експозиция от 60 s. В зависимост от силата на сигнала, допълнителното време на експозиция за оптимална интензивност на сигнала може да бъде избрано съответно. (12) След това се разработва експонираният филм. (13) Като алтернатива на разработването на филми, откриването може да се извърши и с помощта на подходящи системи за документиране, напр. ProXima C16 Phi +, Isogen. (14) Ако е необходимо, петно ​​може да бъде отстранено след откриване и презаредено с антитела. 6-то

4. Информация за поръчка на мембрани Кат. Имобилон (PVDF), 26,5 cm x 3,75 m, размер на порите: 0,2 µm (1 ролка) 42574 Fluorobind (PVDF), 10 x 10 cm, размер на порите: 0,2 µm (20 листа) ), 25 cm x 3 m, размер на порите: 0,2 µm (1 ролка) 42571 Стандарт за протеини SERVA Western Blot Protein Standard 39256 Reagents Tween 20 37470 Реагенти за откриване/комплекти Хемилуминесцентен реагент за хрян пероксидаза 42582 SERVALight Polaris CL HRP WB Субстратен комплект 42584 SERVALight Eos CL HRP WB Комплект за субстрат 42585 SERVAL Лек Helios CL HRP WB Комплект за субстрат 42587 8