Серумно откриване на d-специфични IgE; алергени - Swiss Medical Review
обобщение
Клиничният контекст определя няколко приложения за специфични методи за откриване на IgE. В контекста на първичната медицинска помощ бързите анализи, които могат да се извършват в близост до пациента, имат място като алтернатива на кожните тестове. За обичайната практика в лекарския кабинет се предпочитат количествени методи за скрининг на атопия (Phadiatop или еквивалентни). Тяхната отрицателна прогнозна стойност е полезна за изключване на атопията. В допълнение, разграничението между сезонната и многогодишната алергия е лесно.
За специалисти количествените резултати от специфичен IgE могат да бъдат свързани с вероятността от клинична реакция към алерген. Установени са точки за клинично решение за няколко често срещани хранителни алергени, свързани с атопична екзема при деца.
Въведение
Диагностичният алгоритъм за потвърждаване на IgE-медиирана алергия започва с анамнезата и наблюдението на засягането на заболяването от прицелните органи. Свързването на симптомите на алергия с излагане на външни фактори (напр. Полени, котешка коса) засилва презумпцията за причинно-следствена връзка. Сенсибилизацията към предполагаеми алергени се потвърждава чрез in vivo кожни тестове или серумни тестове за специфичен за алерген IgE. Различните алерген-специфични техники за откриване на IgE обаче нямат същите характеристики.
Кожният тест “Prick” е признат стандарт за демонстриране на незабавни реакции на свръхчувствителност, свързани с общ алерген. Благодарение на бързо достъпните си резултати, кожният тест е избраният инструмент за алерголог. Причинната връзка между симптомите и предполагаемия алерген може да бъде установена по-формално чрез провокационни тестове, ако е необходимо.
Признатите индикации за серумно откриване на специфичен IgE са обобщени в таблица 1. 1 Тези in vitro методи имат много предимства: прецизно количествено определяне, абсолютна безопасност, липса на лекарствена намеса и възможност за съхраняване на проби за последващи анализи. Много технологии могат да се използват за търсене на тези специфични антитела, но техните свойства се различават.
Методи за откриване на специфични IgE алергени
Още през 1967 г. техниката на радиоимуноанализа (RIA) позволява идентифицирането на "реагин" като специфичен IgE за алергени. 2 Човешки моноклонален IgE, пречистен от IgE миелом, се използва за получаване на поликлонални антитела, специфични за тежката верига e. При първоначалния метод за клинична употреба (PhadebasRAST), алергените са фиксирани върху активирани целулозни дискове и позволяват полуколичественото изразяване на резултатите на базата на калибрационна крива, установена със специфичен IgE на прашец от бреза. Относително количество серумен IgE, свързан с алергена, се интерполира въз основа на интензивността на свързването на анти-IgE. Създадена е шесткласова полуколичествена система за оценяване, която се използва и до днес. Използването му обаче трябва да бъде изоставено в полза на количествените стойности в kIU/l. 3
Постепенното усъвършенстване на различните методологични аспекти доведе до настоящите референтни методи, които са количествени, калибрирани по същия международен стандарт 4 и най-често автоматизирани.
Основните технически разработки са както следва.
Алергени и свързване към опората
Използването на алергени в твърда фаза (алергосорбент) или в течна фаза придава различни свързващи свойства на IgE по отношение на специфичност и по-специално афинитет. Възможността за работа в излишък от алергени свежда до минимум тези ефекти, поради което капацитетът на свързване на алергените върху подложката е станал решаващ за осигуряване на добра чувствителност на тези техники. Един от основните постижения е разработването на полимер, капсулиран в хидрофобна матрица, позволяваща ковалентно свързване на големи количества алергени. Този полимер, наречен Pharmacia CAP система, подобри чувствителността и специфичността на откриването на специфичен IgE. Многобройните клинични проучвания, проведени при същите условия, го правят референтен метод днес.
Започвайки от различни технически свойства, други методи са имали паралелно развитие. Корпорацията за диагностични продукти (DPC) избра да работи в разтворима фаза с алергени, маркирани с биотин. Реакцията алерген/IgE антитела на серума на пациента протича в течна фаза, след което се имобилизира върху опора, изградена от топчета, покрити със стрептавидин. Последователността на резултатите, получени по тази техника (Immulite) в сравнение с UNICAP е приемлива. Това е например> 80% за откриване на специфичен IgE срещу храни. 2
Стандартизацията на алергените и сравненията с клиничните данни обаче са постигнати само частично. Всъщност сложната природа на алергенните екстракти представлява голямо предизвикателство за оптимизирането на методите за откриване на специфични IgE алергени. Идентифицирането на основните алергени сред алергичните групи пациенти понякога отнема години. В допълнение, тези алергени могат да се различават в различните държави по-специално. Свойствата на всеки рекомбинантен алерген трябва да се сравняват индивидуално с естествените алергени при пациенти с алергия, какъвто е случаят с фъстъците. 6 Тази усилена работа се води за много алергени.
Подобрението в методите за откриване на специфичен IgE за латекс е скорошна илюстрация на приноса и значението на рекомбинантните алергени за клиничната диагноза. Всъщност основният алерген на естествения латекс, Hevea brasiliensis 5 (Hev b5) е киселинен протеин, лабилен и модифициран по време на екстракция и фиксиране върху опората на матрицата. 7 Добавянето на рекомбинантен Hev b5 протеин към естествения екстракт, фиксиран (добавяне) върху матрицата, позволява повишаване на чувствителността от 10%, без намаляване на специфичността. 8 Клиничното използване на специфичен IgE срещу рекомбинантни поленови протеини също има големи обещания за по-добро предсказване на отговора на имунотерапевтичните лечения.
Втора линия на развитие включва фиксирането на индивидуализирани алергени върху същата опора, след което сигналът се измерва количествено и екстраполира в полуколичествени резултати за всеки от алергените. Тези техники се използват за анализ върху ленти. Те представляват трудности при стандартизацията и възпроизводимостта на някои алергени.
Съвсем наскоро микрочиповите чипове позволиха развитието на нови методи, използващи петна от алергенни протеини, свързани с активирана силициева матрица. 9 Използването на малки количества протеин (напр. 10 nL/петно) в тази роботизирана техника теоретично позволява откриването на специфичен IgE срещу множество отделни протеини, като се използва малко серум. Количественото определяне на сигнала на различните петна се извършва чрез спектрофлуорометрия. Настоящите характеристики на такива методи представляват недостатъци, които не оправдават клиничната употреба в момента.