Реакция на латексна аглутинация
Историческа справка
Методът за реакция на латексна аглутинация (LAT) е предложен за първи път през 1956 г. и се използва за определяне на ревматоиден фактор, като се използват полистиролови латексни микросфери с тясно разпределение на частиците по размер, покрити с човешки гама глобулин. Съобщава се, че взаимодействието на антигени в кръвния серум на пациента с гама глобулин, адсорбиран на повърхността на хидрофобните микросфери на суспензията, води до аглутинация на полимерни частици и образуване на големи агломерати, които лесно се различават с невъоръжено око. През следващите години методът RLA стана широко разпространен, както в клинично диагностични тестове, така и в биохимични и имунологични изследвания. Особено широко приложение на RLA се наблюдава при инфекциозна патология.
Описание на метода на реакция на латексна аглутинация
Реакцията на латекс аглутинация се използва в клиничната химия в продължение на много години като прост, бърз и евтин метод за определяне на протеини, хормони и други биологично активни съединения. Протеините, които са поливалентни антигени, реагират с антитела, образувайки имунни комплекси или аглутинати. По правило имунните комплекси се визуализират зле не само с невъоръжено око, но и с помощта на фотометрични методи. Използването на дисперсионни полимери (латекси), сенсибилизирани с антитела или антигени, дава възможност значително да се улесни откриването на реакцията на аглутинация, която в този случай се нарича реакция на латекс аглутинация.
Носители за метода на реакция на латексна аглутинация
Най-често за получаване на диагностични препарати се използват полистиренови микросфери, които носят на своята повърхност различни функционални групи (карбоксил, епокси, алдехид и др.) И полиакролеинови микросфери, съдържащи алдехидни функционални групи на повърхността си, които могат да реагират с първични амино групи, образувайки a Schiff base Използването на инертни синтетични носители за имобилизиране на антитела (или антигени) е широко разпространен методологичен подход в имуноанализата.
Полимерните микросфери с тясно разпределение на частиците и функционални групи на повърхността представляват голям интерес за биологията и медицината, по-специално за използването като носители на биолиганди вместо еритроцити при създаване на диагностични системи за тестове за различни видове заболявания. Замяната на еритроцитите с полимерни микросфери е решение на проблемите, свързани с недостатъците на диагностиката на еритроцитите, а именно:
За да заменят еритроцитите, полимерните микросфери трябва да имат определени свойства: скорост на утаяване 3 - 8 mm/h, диаметър на частиците около 5 микрона. за ковалентно свързване с функционални групи протеини.
Едно от предимствата на използването на полимерни микросфери като носители на биолиганди е възможността за получаване на полимерни частици с даден набор от свойства. За да се премахнат проблемите, свързани с използването на еритроцити, се използват полимерни микросфери с определени свойства:
- 1) монодисперсно разпределение на размера
- 2) сферична форма
- 3) устойчивост на електролити в широк диапазон на рН
- 4) способността да се прикрепят биологични макромолекули без значителни промени в тяхната функционална активност
- 5) възпроизводими свойства и характеристики
Еднородността на частиците по размер позволява доста точно да се определи повърхността на носителя и да се установи степента на покритието му с биолиганда, освен това определя сходния характер на тяхното поведение по време на аглутинацията, което улеснява „Отчитане“ на резултатите от реакцията на латекс аглутинация (RLA). За първи път полистиреновите микросфери бяха използвани за създаване на диагностични тестови системи. Полистиролът, поради своята оптична прозрачност, висока адсорбционна способност, здравина и добра възпроизводимост на свойствата, успешно се използва като носител.