Практически доклад Разделяне на лактоза и протеини от мляко - Лист - ptitbou
От ptitbou • 8 ноември 2015 г. • Лист • 1 386 думи (6 страници) • 3 402 показвания
G.M Group TD 1.6
Доклад TP III Разделяне на лактоза и млечни протеини
Млякото, продукт от животински произход, съдържа три вида съставки: протеини, въглехидрати и липиди.
Млечните протеини са представени главно от казеини (молекулна маса около 35 kDa = 35 000 g.mol -1).
Има и лактоза (или β-D-галактопиранозил (1 → 4) D-глюкопираноза), която е дизахарид и следователно има молекулна маса (342 Da) значително по-ниска от тази на казеините, които като полипептиди са последователности на d 'амино киселини, всяка от които представлява около 110 Da.
II- Цел на манипулацията
При тази манипулация ни беше предложено да проучим реда на елуиране на различните съставки на млякото, първо като ги отделим един от друг чрез изключваща хроматография, след което да открием тяхното присъствие в различните ни фракции чрез спектрофотометрия. За протеини и чрез реакция с алкохол за ози на Фелинг.
III- Принцип на използваните техники
В тази част ще представим принципите на различните техники на изследване, използвани по време на манипулацията.
Техника на филтриране с гел или изключваща хроматография
Този метод на разделяне ще позволи да се елуират различните съставки на пробата, въведени в хроматографската колона, в зависимост от техния размер и следователно тяхната молекулна маса.
Всъщност гелът, използван при този метод на филтриране (тук Sephalex G-25), няма да взаимодейства чрез химичен афинитет с нашите макромолекули, които представляват интерес (както при афинитетната хроматография), но ще позволи да бъдат разделени, защото зърната, които съставляват три- размерна мрежа, в която могат да проникнат само молекули с ниска молекулна маса. По този начин те ще видят времето си на престой в колоната удължено в сравнение с макромолекулите с висока молекулна маса, които няма да вмъкнат сред микрозърната и ще избегнат без забавяне. Големите молекули, напълно изключени от гела, ще бъдат елуирани с обем разтворител, равен на V 0 (наречен мъртъв обем, той съответства на една трета от общия обем на колоната), докато тези с по-малка молекулна маса, които ще циркулират за по-дълго време в колоната, ще излезе с по-голям обем буфер, равен на V e = V 0 + K d V i с K d, която е константа, специфична за всяка молекула и която варира обратно пропорционално на логаритъма на молекулата маса на разглежданата молекула.