Panserin C6000, среда без протеин за СНО-клетки в суспензия, w L-глутамин

Начало/->
Panserin C6000, среда без протеин за СНО-клетки в суспензия, w: L-глутамин

Използвайте клетки от серум-съдържаща адхезивна култура (напр. DMEM с висока глюкоза с 10% FCS) от log фазата.
Отстранете съдържащата серум среда с пипета.
Измийте клетъчната морава с PBS без Ca, Mg.
Покрийте клетъчната морава с трипсин/EDTA (0,25%, 0,02%) (приблизително 2 ml върху бутилка T25).
Отстранете трипсина след около 1 мин.
Инкубация, докато клетките се закръглят и отделят от субстрата. (след около 5 минути).
Абсорбирайте клетки в DMEM, спрете останалата активност на трипсин с 10% FCS.
Клетките се центрофугират, поемат се в PBS и се центрофугират отново.
Вземете клетки в PBS и определете броя на клетките. Посейте 5 x 104 - 1 x 105 клетки/ml в предварително загрят Panserin C6000.
Използвайте бутилки за култивиране за суспензионна култура (например greiner bio-one, код 690 190).
Инкубация при 37 ° C и обгазяване с 5% CO2 в инкубатора.

Фаза на изоставане настъпва през първите няколко дни, като почти няма пролиферация на клетки. След около 7 дни обаче клетките са свикнали със средата без протеин и са се увеличили до 1 × 106 клетки/ml.

Прехвърлете клетките в прясна среда на всеки 3 до 4 дни.

Семе 3 - 5 х 104 клетки/мл.

Време на генериране CHO в Panserin C6000: 16.5 часа.