Определяне на Rh - фактор Synevo

Главна информация

Индивидът се счита за Rh положителен, ако неговите еритроцити експресират D антигена, а терминът Rh отрицателен се отнася до отсъствието на D антиген. Отсъствието на D антиген се установява при 15-17% от индивидите в бялата популация и е по-рядко срещано при други популации. При бялата популация липсата на D антиген се дължи на делецията на гена RHD, докато в азиатската и чернокожата популация е свързана с инактивация на гена, а не с делецията му. .

Някои еритроцити, експресиращи D антиген, изискват продължителна инкубация с анти-D реагент за аглутинация. Тези еритроцити се считат за D положителен антиген и са описани като слаб D, наречен преди това D u (в по-малко от 1% от случаите). Счита се, че слабият фенотип D се проявява чрез един от следните три механизма 5:

а) наследяване на RHD ген, кодиращ протеин D с отслабена антигенна експресия: той е по-често срещан в чернокожата популация и е свързан с Dce хаплотипа, а в бялата популация е свързан с DCe или DcE хаплотипа.
б) взаимодействие на D гена с други гени: индивидите с D гена в транс позиция по отношение на С гена (например: Dce/Ce) показват отслабена експресия на D гена.

Хората със слаб D фенотип по един от тези два механизма не образуват алоантитела след излагане на D-положителни еритроцити.

в) наследяване на ген, кодиращ антигенен D комплекс, в който липсват някои епитопи, наричан още частичен D; тези индивиди могат да произведат анти-D, ако им се прелее с D-положителни еритроцити. От тях D VI има най-малък брой епитопи и тези хора имат най-висок риск от имунизация, но значително по-нисък от отрицателните D хора 3 .

Донорите с нисък D трябва да се считат за Rh (D) положителни; важно е те да не бъдат етикетирани като Rh отрицателни, тъй като слабият D антиген може да предизвика имунен отговор, ако се прелее на Rh отрицателен индивид 1; 3; 5. Лица със слаб D могат да бъдат преливани с Rh-положителна кръв (с изключение на D VI), а бременните жени не се нуждаят от анти-D 2 имуноглобулинова профилактика; Ако се използва подходящ анти-D моноклонален реагент, повечето антигенни детерминанти, класифицирани преди като D u, вече не трябва да се разграничават от D при рутинни условия. .

Нулевият Rh фенотип се появява, когато еритроцитите не експресират Rh антигени по поне два възможни механизма: наследяване на ген, кодиращ анормален Rh-свързан гликопротеин с нормални RHD и RHCE гени, или наследяване на отрицателна D-асоциирана RHCE генна мутация. Rh нулевият фенотип е свързан със структурни аномалии на еритроцитите със стоматоцитоза и хемолиза. Тези индивиди образуват алоантитела, които взаимодействат с всички, освен с еритроцитите. .

Анти-Rh антителата се получават чрез алоимунизация, след несъвместими трансфузии в Rh системата или по време на бременност. Изключително рядко в Rh системата могат да се появят естествени антитела, без известни антигенни стимули (anti-E, anti-C w), в повечето случаи клинично без значение 1; 3. Също така при хемолитични имунни анемии, автоантителата често имат анти-Rh 1 активност .

Повечето анти-Rh антитела са IgG, особено IgG1 и IgG3 (непълни аглутинини), въпреки че някои може да са IgM и обикновено не активират комплемента 5. IgM-подобни свързващи антитела обикновено са преходни и се появяват в началото на имунизацията 1. Най-често срещаните са анти-D антитела, които могат да причинят хемолитична болест на новороденото и тежки хемолитични трансфузионни реакции. Честотата им намалява значително с анти-D профилактика при Rh-отрицателни бременни жени с Rh-положителен плод. Антителата срещу C, c, E, e са свързани с хемолитична болест на новороденото и леки трансфузионни хемолитични реакции 5 .

Rh отпечатването на еритроцитите се извършва с моноклонални анти-D серуми, които реагират във физиологичен разтвор и съдържат както човешки IgM (който не открива категория D VI) 3, така и поликлонални IgG антитела, като последните могат да се използват и в антиглобулиновия тест за D слабо 2. Човешки или говежди албумин се добавя към приготвянето на анти-Rh серума, който модифицира диелектричната константа на средата и благоприятства аглутинацията на Rh-положителни еритроцити 1 .

Препоръки за определяне на Rh фактор

преди кръвопреливане;
преди инвазивна или хирургична процедура, потенциално свързана с усложнения от кървене, които могат да изискват трансфузия;
предродилно и постнатално имунохематологично наблюдение на майката и детето;
на кръводарители.

Рутинното изследване на кръвта не показва определянето на други Rh антигени освен Rh фактор D. Определянето на пълния Rh фенотип е показано при донори на кръв, трябва да се има предвид при кръвопреливания при момичета и жени в пременопауза, при хронично трансфузирани пациенти и реципиенти с нередовни антиеритроцитни антитела 3 .

Обучение на пациента - не се изисква предварително обучение; информация за инфузионни лечения с макромолекулни разтвори, извършени преди определянето, преливане през последните 120 дни е полезно 4 .

Събран образец - а) капилярна кръв от пулпата на пръста; б) венозна кръв 4 .

Контейнер за прибиране на реколтата - б) вакуутан без добавки или активиращ гел (червена или безцветна капачка); за автоматичен метод: 4 ml вакуунер, съдържащ EDTA (тъмно лилав капак) 4 .

Количество прибрано - б) доколкото вакуумът позволява 4 .

Причини за отхвърляне на доказателствата - силно хемолизиран образец 4 .

Стабилност на пробата - тестът се извършва незабавно, ако това не е възможно, пробата се държи 48 часа при 2-8 ° C; за автоматичния метод кръвната проба има стабилност от 7 дни при 2-8 ° C 4 .

Необходима е обработка след прибиране на реколтата - след пълна коагулация при стайна температура серумът и съсирекът се отстраняват. От останалите червени кръвни клетки се приготвя 40% суспензия в собствена плазма или във физиологичен разтвор. За метода на картонена аглутинация се приготвя суспензия от 5% червени кръвни клетки в специална суспензионна среда 1; За автоматичния метод кръвната проба ще бъде центрофугирана за получаване на плазма и ще бъде вкарана в анализатора (плазмата ще остане над червените кръвни клетки) 4 .

Метод за определяне - в лабораториите на Synevo се извършват следните методи:

- хемаглутинация на плочата с анти-D IgM моноклонален реагент 4. Определянето се извършва с два различни типа моноклонални антитела, а тестът включва автоложния контрол (албуминов контрол - тествани са еритроцитите на пациента със средата, в която се съдържат моноклонални Acs), както и контролна група О червени кръвни клетки, Rh положителни и Rh отрицателни 1; 3 .

- аглутинация и гел-филтрация върху карти с микроепруветки, съдържащи гел, импрегниран с еритроцитния антиген-специфичен реагент, който трябва да бъде определен (миши или човешки моноклонални антитела) - директен ABO групов тест и определяне на Ag RH1 (D) и Ag RH 1,2,3 (DCE).

Известна контролна група и Rh кръв се използват при всеки цикъл на пробите 4 .

- автоматичен метод на хемаглутинация върху плочи с кладенци (в централната лаборатория Synevo)

Работните плочи (Erytype S) съдържат 12 тестови ленти с по 8 ямки всяка (1 лента = пълен ABO тест и Rh фактор). За определяне на Rh се използват 2 сухи моноклонални анти-D IgM серума, облицоващи две от ямките на лента 4. .

Тълкуване на резултатите

За метода на хемаглутинация на плочата

Получатели на кръв и новородени:

Rh (D) положителен, ако се получат явно положителни резултати (> = 2 +) както с анти-D тестови серуми, така и контролът на автомобила е отрицателен;
Rh (D) отрицателен, ако се получат явно отрицателни резултати и с двата анти-D тестови серума, независимо от резултата от теста на автомобила.

Необходимо е допълнително тестване, ако се получат лоши резултати (3 .

При донори, ако първоначалният тест за D е отрицателен, трябва да се извърши втори тест за откриване на слаб D (това не се изисква при получатели на кръв, които трябва да се преливат с Rh отрицателна кръв). Също така, определянето на наличието на слаб D при бременни жени елиминира ненужното анти-D имуноглобулиново лечение. Преди да обозначим пациента като слаб D, трябва да се уверим, че наскоро той не е бил прелян с Rh положителни еритроцити 2 .

За метода на аглутинация на карти положителната реакция се потвърждава само ако контролната микротръба е отрицателна. Положителната реакция се оценява в зависимост от дисперсията на аглутинатите в микротръбата от + до ++++, както следва: - положителен резултат (++++); - слаб положителен резултат (+ до +++); - отрицателен резултат (-).

Тълкуване на резултата в микроепруветката RH1 (D)

Положителен резултат в микроепруветката RH1 (D) показва наличието на антиген RH1 (D) на повърхността на изследваните еритроцити. Картите ABO/RH, използвани в лабораторията, не позволяват откриването на всички слабо имуногенни D антигени, нито на фенотип RH1 частично категория VI (D VI)

За тези специфични антигени трябва да се направят допълнителни тестове.

Интерпретация на резултата в микротръбата RH1,2,3 (DCE)

Положителен резултат в епруветката RH1,2,3 (DCE) показва наличието на RH1 (D) и/или RH2 (C) и/или RH3 (E) антиген на повърхността на червените кръвни клетки, които ще бъдат тествани. .

След протичане на реакцията на аглутинация, всяка ямка на работната лента се оценява и снима автоматично от анализатора, като резултатите се интерпретират по следния начин:

Положителна реакция - наличие на аглутинация (интензивността се изчислява от 1+ - 4+)
Отрицателна реакция - липса на аглутинация
Неубедителна реакция - реакцията +/- ще бъде интерпретирана от лекаря

Всички получени изображения и резултати се проверяват и валидират от лекаря 4 .

Граници и смущения

Фалшиво положителни реакции (положителен албуминов контрол) 1

червени кръвни клетки в ролки/рула (миелом, макроглобулинемия на Waldenström) - определянето се възстановява след измиване на червените кръвни клетки;
полиаглутина;
хемолитични анемии с горещи автоантитела (наличие на IgG антитела на повърхността на червените кръвни клетки) - групата се възстановява с реагент, от който се отстранява албуминът, който съдържа анти-D свързващи вещества, способни да аглутинират червените кръвни клетки във физиологична суспензия (анти-D физиологичен разтвор).

хемолитична анемия на новороденото (блокиране на антигенни D места от майчините антитела) 1;
индивид със слаб Rh D - възможна слаба и късна аглутинация; тези случаи са насочени към специализирана служба, където слабото D се определя с помощта на индиректния антиглобулинов тест с анти-D IgG (непълен поликлонален) 1; 3 .