Намаляването на хранителната пшеница намалява нивото на дезоксиниваленол в урината при възрастни

хранителната

  • Резюме
  • Въведение
  • Методите
  • Изучаване на дизайн
  • Хранителен вестник
  • Екстракция на DON в урината
  • LC - MS анализ на извлечен DON
  • Анализ на креатинина
  • Статистически анализи
  • Резултати
  • Дискусия
  • Терминологичен речник

Резюме

Методите

Изучаване на дизайн

Изследването се проведе за период от 7 дни и в него участваха 25 доброволци, включително 16 жени и 9 мъже, на възраст от 21 до 59 години. На 1 и 2 ден ("нормална диета") се водеха полупретеглени хранителни дневници, а на 3 ден се получава първа празна проба сутрин. На 3-6-ия ден („намалена намеса от пшеница“) доброволците бяха помолени да ограничат списъка с хранителни продукти, които могат да съдържат пшеница (хляб, сладкиши, тестени изделия, зърнени закуски и др.) И да ги заменят с елементи от този списък. предложени алтернативи (напр. ориз, картофи). Ден 5 и 6 от дневника на храната отново се водят и първата празна проба от урина сутрин е получена на ден 7. Информирано съгласие е получено от всички доброволци преди проучването и е получено етично одобрение, получено от Националния съвет по етика на NHS, Брадфорд, Великобритания. .

Хранителен вестник

Хранителните дневници бяха напълно кодирани с помощта на вътрешен софтуер за анализ на храни, базиран на Microsoft Access, който използва UK Composition of Foods (Holland et al., 1992). За да оценим спазването на интервенцията, сравнихме честотата на консумация на определени групи храни (хляб, сладкиши, зърнени закуски и тестени изделия) по време на нормална диета (дни 1 и 2) с тази на интервенцията (дни 5 и 6). Освен това се изчислява теглото на определени хранителни продукти и се определя консумацията на храни на основата на пшеница за всеки индивид въз основа на основните източници на пшеница (хляб, зърнени закуски, рула, тестени изделия, сладкиши и др. Бисквитки). В храната се намират и други източници на пшеница, като сосове и сгъстители. Въпреки това, техният принос в общия прием на пшеница е оценен от относително незначително значение.

Екстракция на DON в урината

Общият DON на урината беше измерен, като се използва модификация на метода на Meky et al. (2003) и използването на 13 C-DON (Biopure Referenzsubstanzen, Tulln, Австрия) като SI. IS беше смес, съдържаща предимно 13 C 15-DON (молекулно тегло (M) 311), но също така 13 C 14-DON (M. 310; 16.8%). Пригодността на това съединение като IS в LC-MS/MS анализ на DON-замърсени зърнени култури е установена наскоро (Haubl et al., 2006).

При нашия анализ на урината пробите се центрофугират (2000 g; 15 минути; 4 ° C) и при 4 ml урина се добавя SI, за да се получи крайна концентрация от 5 ng/ml. РН на всяка проба се регулира на 6, 8 и 23 000 U β-глюкуронидаза (тип IX-A от Escherichia coli; Sigma) в 1 ml KH 2 PO 4 75 mM се инкубират във водна баня при разбъркване в продължение на 18 часа . при 37 ° С. След разграждане пробите се центрофугират (2000 g; 15 минути; 4 ° C) и супернатантата се разрежда до 16 ml с PBS (рН 7,2). Разреденият материал се прекарва през DONtest ​​имуноафинитетни колони (Vicam, Watertown, МА, САЩ), за да се извлече DON съгласно инструкциите на производителя. DON се елуира от колоните с 4 ml метанол и екстрактите се сушат под вакуум, като се използва Savant Speed ​​Vac и се разтварят в 250 ul 10% (v/v) етанол за анализ. Две аликвотни части от проба от урина с известни нива на DON също бяха добавени със SI и анализирани с всяка партида проби, тествани като контрол на качеството (QC).

LC - MS анализ на извлечен DON

DON се анализира чрез HPLC (Waters 2795 Separation Module, Milford, MA, USA) с детекция от MS (Micromass Quattro Micro тройно квадруполен масспектрометър, Манчестър, Великобритания). Разделянето на DON се извършва с помощта на колона Luna C18 (150 × 4.6 mm, размер на частиците 5 µm (Phenomonex, Macclesfield, UK). Подвижната фаза се стартира при 20% метанол и се подлага на изохроматично третиране в продължение на 10 минути. фаза в продължение на 6 минути Една минута се провежда със 75% метанол, след което се въвежда отново 20% метанол чрез уравновесяване на системата при тази концентрация за още 11 минути, скоростта на потока е 1 ml/min и инжекционният обем 25 μl. елуентът от HPLC колоната се насочва в камерата за десолватиране на MS, а останалата част се изпраща към изпускането.