ДНК на човешки херпес вирус (HHV) тип 6 (кръв, ликвор) - Synevo
Главна информация
Човешкият херпес вирус тип 6 - Човешки херпес вирус 6 (HHV-6) - е изолиран през 1986 г. от Salahuddin et al. . Той принадлежи към подсемейство β-херпесвируси, род Roseolovirus и е описан в два варианта: A и B. HHV-6B е основният агент, участващ в етиологията на кожното състояние - exanthema subitum (roseola infantum или 6-то детско заболяване) - в докато HHV-6A се открива главно при имунокомпрометирани гостоприемници 2 .
HHV-6 е ДНК вирус, неговият геном е заобиколен от липидна обвивка. Както при другите херпесни вируси, HHV-6 причинява както първични инфекции, така и реактивации на латентни инфекции. .
HHV-6 е широко разпространен, като 95% от населението има антитела срещу HHV-6; Вирусът обикновено се предава чрез слюнката на заразените хора.
In vivo, HHV-6 заразява и репликира в CD4-положителни лимфоцити чрез CD46 клетъчния рецептор, който е 52-57kDa трансмембранен гликопротеин, който взаимодейства с вирусни гликопротеини: gH, gL, gQ1 или gQ2.
По време на остра инфекция се наблюдава репликация в лимфоцити (B, T, NK), макрофаги, хистиоцити, ендотелни клетки, хепатоцити, слюнчени жлези и централната нервна система. HHV-6A преобладаващо инфектира нервните клетки, докато HHV-6B се среща по-често в мононуклеарните клетки на периферната кръв. Вирусът произвежда директна цитолиза, като този ефект е отговорен за кожни прояви и подобни на инфекциозната мононуклеоза. HHV-6 увеличава CD4 експресията на повърхността на Т лимфоцитите, което води до повишена чувствителност към HIV инфекция.
Първичната инфекция настъпва след инкубационен период от 1-2 седмици, обикновено при кърмачета (40 - 50% от децата се разболяват през първата година от живота, като процентът на заразените достига 77 - 82% до 2-годишна възраст)., с пик между 9 и 21 месеца) и е отговорен за една трета от случаите на фебрилни гърчове при деца на възраст 6-24 месеца. Приблизително 25% от инфекциите с HHV-6 се проявяват като exanthema subitum (roseola infantum), характеризираща се с висока температура с продължителност 3-4 дни, последвана от макулни или макулопапулозни обриви, които се появяват, когато температурата се нормализира. Обривите започват от багажника или шията, разпространяват се по лицето и крайниците и продължават между няколко часа и 2 дни. Заболяването може да бъде придружено и от: кашлица, цервикална или тилна лимфаденопатия, раздразнителност, конюнктивит, оток на клепачите, изпъкване на фонтана, ринорея или диария. Клиничните прояви продължават средно 9 дни и рядко се усложняват от менингит или енцефалит.
HHV-6 е рядка причина за менингит; Вирусът може също да причини енцефалит при привидно здрави деца с нарушено съзнание, гърчове, психоза или черепно-мозъчни нерви. В повечето случаи именно паненцефалията може да бъде свързана с постоянни неврологични последствия 2. ДНК на HHV-6 е открита в ликвора при до 57% от децата 1 .
Острата инфекция с HHV-6 е рядка при имунокомпетентни възрастни и може да се прояви като синдром, подобен на инфекциозна мононуклеоза с треска, лимфаденопатия, генерализиран обрив, фулминантни хепатити, тромбоцитопенична пурпура, миокардит или енцефалит.
След първичната инфекция вирусът остава латентен в лимфоцитите и моноцитите, персистира на ниско ниво в различни клетки или тъкани и може да се активира отново, когато имунната система е нарушена. При имунокомпетентни индивиди тази персистираща инфекция няма последствия.
Реактивацията на HHV-6 е често проявление при имуносупресирани индивиди (50% от пациентите с трансплантация на хематопоетични стволови клетки и 33% от тези с трансплантация на твърди органи), а вирусна ДНК може да бъде открита в периферна кръв. Реактивациите се случват през първия месец след трансплантацията и са по-чести при пациенти, лекувани с анти-CD3 антитела или кортикостероиди, или при тези, които са претърпели алогенна трансплантация или стволови клетки от пъпна връв. Пациентите често имат треска и обрив в ранния посттрансплантационен период. HHV-6 инфектира хематопоетични родословни клетки чрез инхибиране на образуването на колонии in vitro и е свързан в някои проучвания с потискане на костния мозък и късно присаждане. 95% от вирусните реактивации при пациенти с трансплантация на хематопоетични стволови клетки се дължат на HHV-6B.
Най-добре документираната проява при имуносупресирани пациенти е енцефалитът. Те се появяват на интервал от 2-6 седмици след трансплантацията с главоболие, объркване, конвулсии, психоза или дефицити в черепните нерви. Докато CT изследването обикновено е нормално в началната фаза, MRI показва аномалии в сивото вещество в темпоралните лобове при 75% от пациентите. Положителната диагноза се установява въз основа на наличието на вируса в цереброспиналната течност.
При пациенти с трансплантация също са докладвани случаи на гигантскоклетъчен хепатит, колит и гастродуоденит, свързани с HHV-6.
HHV-6 е по-рядко замесен в енцефалит и пневмония при пациенти със СПИН и не се смята, че влияе върху скоростта на прогресиране на HIV инфекцията до стадия на СПИН.
HHV-6 е свързан с множествена склероза въз основа на откриването на ДНК и вирусни антигени в ликвора и мозъка. По този начин, HHV-6 е открит в ядрата на олигодендроцитите в лезиите на пациенти с множествена склероза, изследователите откриват силна връзка между наличието на антитела срещу HHV-6 IgM в цереброспиналната течност и ранните стадии на множествената склероза. Някои твърдят, че вирусната инфекция играе важна роля в патогенезата на болестта, чрез молекулярна имитация, с вирусни протеини, които реагират напречно с основния протеин на миелина. Необходими са обаче допълнителни изследвания, за да се определи напълно ролята на HHV-6 при множествена склероза 2. .
Положителната диагноза на първична инфекция може да бъде демонстрирана чрез сероконверсия на IgG антитела от отрицателна в положителна или чрез наличие на IgM антитела. Увеличаването на титъра на IgG антитела 4 пъти показва активно заболяване. Въпреки това, серологичната диагноза не може да разграничи първична инфекция от реактивация. Алтернативен метод за диагностика е откриването на вирусна ДНК в серума или плазмата преди появата на антитела, но този метод е по-малко специфичен от сероконверсията.
При имунокомпрометирани индивиди е важно да се прави разлика между латентна инфекция (без клинични прояви) и реактивиране, което може да се постигне чрез определяне на вирусна ДНК в плазмата 2. .
Препоръки за определяне на HHV-6 - ДНК - полезен при бързата диагностика на HHV-6 инфекции 4 .
Обучение на пациента - не се изисква 3 .
Събран образец - а) ще дойде кръв; б) цереброспинална течност, събрана чрез лумбална пункция 3 .
Контейнер за прибиране на реколтата - а) вакуутан, съдържащ EDTA като антикоагулант; б) стерилен контейнер за ликвор 3 .
Количество реколта - а) доколкото вакуумът позволява; б) минимум 2 ml 3 .
Необходима е обработка след прибиране на реколтата - а), б) доказателствата не ще се центрофугира 3 .
Причини за отхвърляне на доказателствата - а) стари, коагулирани, хемолизирани проби; използване на хепарин като антикоагулант 3 .
Тествайте стабилността - проби от кръв или ликвор са стабилни за 1 седмица при 2-4 ° C 3 .
Метод - PCR Light-Cycler в реално време: верижна полимеризационна реакция с откриване в реално време на натрупания PCR продукт, чрез измерване на излъчената флуоресценция (тестът ще се извърши от плазма или CSF) 3 .
Референтни стойности - HHV-6 неоткриваема ДНК 3 .
Граница на откриване - 10 деца/проба 3 .
Тълкуване на резултатите
Получаването на положителен резултат за плазмената ДНК на HHV-6 при наличие на клинична картина е показател за активна инфекция.
Откриването на ДНК на HHV-6 в цереброспиналната течност предполага наличие на инфекция в централната нервна система, но няма абсолютна диагностична стойност (може да има ДНК на HHV-6 в ликвора и други състояния на ЦНС, които не са свързани с този вирус; също може да се открие и при пациенти без неврологични синдроми) 1; 2; 4 .
Граници и смущения
Отрицателният резултат не изключва инфекция с HHV-6 4 .
Полезността на PCR теста за диагностициране на HHV-6 инфекции се усложнява от факта, че HHV-6 е интегриран в хромозомната ДНК при 0,7-1,5% от хората. Стволовите клетки, които съдържат вградени копия на HHV-6, предават вирусна ДНК на реципиенти. Поради тази причина, ако анализираната проба съдържа левкоцити, е възможно да се получи положителен резултат при липса на активна инфекция 2 .
1. Гай Бойвин. Диагностика на херпесвирусни инфекции на централната нервна система. В HERPES 11, Допълнение, 2004.
2. Джефри И. Коен, човешки херпес, типове 6 и 7. В Mandell, Douglas и Bennett’s Principles and Practice of Infectious Diseases, 7th edition, Churchill Livingstone, Elsevier, 2010, 2011-2014.
3. Лаборатория Синево. Специфични препратки към използваната работна технология 2015 г. Тип на справка: Каталог.