Техники на гастроектомия на ръкавите и модифициран стомашен байпас на Roux-en-Y в протокол за мишки (в превод

Резюме

Въведение

Бариатричните процедури обаче са трудни за директно адаптиране към малки животински модели и изискват висока хирургична сръчност. Докато SG може лесно да се извърши при гризачи с много добра степен на преживяемост, DGRY е смъртоносен при мишки поради тежки чревни обструкции 5. Предложени са различни модифицирани DGRY техники за отстраняване на този проблем, най-вече езоеюностомията. Тук представяме друга алтернатива: гастроеюностомия без изрязване на стомаха. Този модифициран DGRY имитира повечето от благоприятните ефекти, наблюдавани при хората (например значително намаляване на телесното тегло и подобряване на кръвната захар и липидната хомеостаза).

Този ръкопис има за цел да обобщи и обсъди техническите и експериментални подробности за SG и DGRY при мишки и да улесни тези процедури с помощта на видеоклипове. Специален акцент ще бъде направен по отношение на оптимизирането на протоколите за предоперативна и следоперативна грижа, които позволяват намаляване на витамините и дефицита на желязо.

Необходим е абонамент. Моля, препоръчайте JoVE на вашия библиотекар.

Протокол

Животни и настаняване: Получете 8-седмична възраст от мъжки мишки C57BL/6. На 10-седмична възраст дайте на C57BL/6 свободен достъп до вода и диета с високо съдържание на мазнини (DIO диета: 35% kcal от мазнини, 25,8% казеин, 1,30% минерални НСПВС, 1,30% витамини, 1,70% дикалциев фосфат, 0,7 карбонат% калций, 2,10% цитрат калий, 0,026% холин битартрат, 8,9% захароза, 0,384% цистин, 6,5% целулоза, 31,7% свинска мас, 3,3% соево масло и 16,29% малтодекстрин) за 8 (SG) или 14 (RYGB) седмици преди операции за отслабване. За да насърчите увеличаването на теглото, дайте на мишката, посветена на DGRY хирургия (фалшива и DGRY) вода, съдържаща 20% фруктоза (w/v) в допълнение към диетата с високо съдържание на мазнини.

Етична декларация: Всички стъпки на протокола, описани по-долу, следват указанията на етичната комисия на Pays de la Loire по експериментиране с животни под номер на одобрение 01.953.01.

1. предоперативна обща подготовка

2. ръкавна гастректомия: Хирургична процедура

3. Стомашен байпас на Roux-en-Y: Хирургична процедура

4. Общи следоперативни грижи

  1. Спрете изофлурана и продължете с дебит на O 2 от 0,8 L/min, докато мишката се събуди напълно. Не оставяйте мишката без надзор, докато тя си възвърне контрола над мотора, посочено от животните, които напускат да се движат около клетката и да могат да стоят и да ходят, без да падат.
  2. Поставете мишката (само една мишка на клетка) във фурна при 30 ° C, температурни условия за 5 дни.
  3. Поддържайте добавките с желязо (0,5 mg/kg/ден, подкожно инжектиране) и витамини (800 mg/180 ml във вода) при DGRY мишки до края на протокола.
  4. Върнете безплатен достъп до хранителни гел храни (богата на гел диета: 10% свинска мас, 10% течна захар, 57% вода) в продължение на 5 дни след операцията. Отново въведете твърда храна 3 дни след операцията.
  5. Инжектирайте подкожно бупренорфин (0,1 mg/kg, два пъти дневно, от ден 0 до ден 3 след операцията), мелоксикам (1 mg/kg, от ден 0 до ден 3 след операцията), метоклопрамид (1 mg/kg, ден 0 до 5 дни след операцията) и марбофлоксацин (10 mg/kg, ден 0 до ден 3 aFTE Surgery r).

5. Постоперативни метаболитни параметри

  1. Мярка на на алиментарна консомация
    1. Оставете мишките да се възстановят в продължение на 1 седмица след операцията. Къща за мишки до клетка. Измерете количеството твърд фураж, поставен в клетката. Оставащото тегло 24 часа по-късно. Повтаряйте тази стъпка толкова дълго, колкото е необходимо.
  2. Тест за орален глюкозен толеранс
    1. Бързо мишките в продължение на 6 часа преди пероралния болус. Съберете капка кръв от върха на опашката и я нанесете върху глюкозна лента, поставена в глюкомер, за да определите времето 0 стойност на кръвната глюкоза.
    2. Прилагайте орален болус от 20% разтвор на D-глюкоза (2 g/kg). Измерете нивата на глюкозата в кръвта на 15, 30, 60 и 120 минути след сонда.
  3. Анализ на нивата на хемоглобина
    1. Използвайки хематологична система, измерете 20 µl прясна кръв, за да вземете проба от нивото на хемоглобина.
". Евтаназия> 6

  1. Анестезирайте мишките чрез интраперитонеално инжектиране на разтвор на ксилазин/кетамин (10/80 mg/kg). Извършете дислокация на шийката на матката. Проверете пълната евтаназия, като се уверите, че сърцето не бие и рефлексът на мига на очната ябълка е загубен.

Необходим е абонамент. Моля, препоръчайте JoVE на вашия библиотекар.

Представителни резултати

Правила и условия

Средното работно време за процедурата SG е 49,3 ± 1,5 минути. Отстранихме 62,8 ± 5,0 mg от стомаха, което е около 80% от стомаха. Нито една мишка не е умряла по време на операцията или през следващите седем дни. Една мишка (7,1%) умира на постоперативния ден 11 поради стомашна обструкция, причинена от безоар.

Средното работно време за процедурата DGRY е 89,1 ± 2,8 минути. Смъртността е значително по-висока след DGRY (фалшив: 25% срещу DGRY: 66,6%; p = 0,038). Основните причини за следоперативна смърт са изтичане на анастомоз (n = 8), анастомотична стеноза (n = 5), усложнения на анестезията (n = 4) и следоперативен кръвоизлив (n = 2). Наблюдавахме и две дългосрочни смъртни случаи поради гастростеноза на анастомозата с хронична обструкция и недохранване. Както е показано в фигура 3, забелязахме постепенно подобряване на следоперативния процент на оцеляване в целия протокол, което показва, че е необходимо интензивно хирургично обучение за овладяване на хирургичната техника DGRY.