Стандартизиран метод за високопроизводителна стерилизация на протокола от семена на Arabidopsis (преведен на
Обобщение
Целта на това проучване е да се определят ефектите на стерилизацията на белина и хлорен газ върху кълняемостта на семена от редица генотипове на Arabidopsis, отглеждани на стерилни среди. Разработени са оптимизирани протоколи за стерилизация, за да се предотврати растежа на микробни замърсители, като същевременно се осигури задоволителна преживяемост на семената.
Резюме
Въведение
Два основни метода, използвани за стерилизация на семената на Arabidopsis, разчитат на търговски избелващ препарат (течна фаза) и хлорен газ (парообразна фаза). Използвани са различни методи както за течна фаза стерилизация 1, 4, 5, 6, 7, 8, 9, стерилизация за семена 10, така и за парна фаза Arabidopsis 8, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16. Въпреки това, докато тези процедури са били ефективни при извършване на стерилизация на семена на използваните генотипове, не се съобщава подробен анализ на ефекта от стерилизирането на различни обработки върху семена от различни генотипове. Следователно е необходима оптимизация на тези процедури за стерилизация, за да се определят условията, при които ефективната стерилизация се комбинира с високи нива на покълване.
Биологичният ресурсен център на Арабидопсис (ABRC) е уникално разположен, за да а) тества жизнеспособността на семена от различни генотипове в колекцията и б) да се възползва от процедурите за контрол на качеството, прилагани вътрешно и в отговор на обратната връзка на потребителите относно покълването на семената. Представените тук експерименти имат за цел да определят ефектите от различните методи за стерилизация върху покълването на семена от редица генотипове на Arabidopsis. Показани са оптимизирани процедури за стерилизация, които водят до високи нива на покълване на семената, като същевременно поддържат минимално замърсяване с патогени за стерилизация с белина и хлорен газ.
Протокол
1. подготовка на 1 x среда Murashige и Skoog (MS)
2. Стерилизация на семената на Arabidopsis с белина
3. Стерилизация на семената на Arabidopsis с хлорен газ
4. Растежът на Arabidopsis на MS плочи
Представителни резултати
Семената на Arabidopsis, събрани от отворена камера на оранжерията и отглежданото поле, понякога са замърсени с различни микроорганизми като бактерии и гъбички, 1, 4. По този начин покълването на семена върху стерилни среди може да бъде особено трудно поради замърсяване на плочите, особено ако доставката на семена е ограничена. Оптимизираният протокол за стерилизация на белина и хлорен газ, резултатите от които са представени по-долу, минимизира този проблем и запазва жизнеспособността на семената, необходими за приложения с висока производителност.
Ефекти от стерилизацията на белина върху покълването на семената на Arabidopsis Col-0
Според тези резултати, лечение с концентрация на газ от 6,1% за 1 h (таблица 2) е избрана като най-доброто условие за стерилизация с парна фаза, за да се тества ефектът от стерилизацията на газ върху различни мутантни линии, тъй като тя съчетава (висока степен на покълване 85%) с много ниско ниво на замърсяване с плесени (0,02%).