SERVALight EosUltra Western Blot Chemiluminescence HRP Substra Kit - PDF Free Download

1 РЪКОВОДСТВО ЗА ПОТРЕБИТЕЛИ EosUltra Western Blot Chemiluminescence HRP Комплект субстрат (кат. №) SERVA Electrophoresis GmbH Carl-Benz-Str. 7 D Хайделберг Телефон, факс

servalight

2 Съдържание 1. SERVALIGHT EOSULTRA Обща информация Компоненти на комплекта Условия за съхранение 2 2. ИЗПЪЛНЕНИЕ НА ОТКРИВАНЕТО Важно в началото Необходими материали и разтвори, които не са предоставени Схема на протокола за откриване на Western Blot 5 3. РЕШЕНИЯ ЗА ПРОБЛЕМА 7 4. ИНФОРМАЦИЯ ЗА ПОРЪЧКА 8 Вер 03/12 1

3 1. SERVALight EosUltra 1.1. Обща информация SERVALight EosUltra е високочувствителен хемилуминесцентен субстрат за откриване на конюгати от хрян пероксидаза (HRP), напр. белязани антитела върху имуноблоти. Интензивността на сигнала на субстрата позволява откриване на антиген в долния обхват на фемтограмата (10-15). Предимства: Откриване на филми или със системи за документиране, подходящи за хемилуминесценция, напр. ProXima C16Phi +, Isogen Много кратко време на експозиция и/или по-високи разреждания на антитела поради оптимизирани, интензивни светлинни сигнали SERVALight EosUltra не е подходящ за използване в диагностика или други клинични приложения, а само за изследвания и разработки. SERVALight се произвежда от Cyanagen Srl. Cyanagen Srl е предмет на следните американски и европейски патенти САЩ, ЕП, САЩ, както и вече подадени и съответно валидни патенти за други държави Компоненти на комплекта Кат. SERVALight EosUltra Luminol Solution SERVALight EosUltra Peroxide Solution ml 10 ml ml 50 ml ml 100 ml 1.3. Условия за съхранение Съхранявайте комплекта при 2 8 C. Ако се съхранява при препоръчителната температура, той може да се използва поне до: вижте етикета. 2

6 2.3. Схема на инкубация за блокиране на електрофореза чрез гел за откриване на петна от Western Block 1. Инкубация на антитела 2. SERVELight EosUltra Detection 2.4. Протокол (1) Отстранете петно ​​от блот апарата и след това го блокирайте при стайна температура (мин) или при 2-8 ° С за една нощ. (2) Отстранете блокиращия реагент и добавете първия работен разтвор на антитела в подходящо разреждане. Инкубация за 1 h при стайна температура или за една нощ при 2-8 ° С с разклащане. (3) Последващо измиване на мембраната с промивен буфер (5 минути). Повторете стъпката на измиване 4-6 пъти. По-големите буферни обеми или броят на стъпките на измиване могат да помогнат за намаляване на фона. (4) Добавете подходящото разреждане на HRP конюгата. 1 h инкубация на петно ​​при стайна температура с разклащане. (5) Повторете стъпка (3). (6) Преди откриването, разтворите за откриване трябва да са със стайна температура. (7) Пригответе работния разтвор на субстрата чрез смесване на равни пропорции на разтвор на пероксид с разтвор на луминол. Трябва да се използват 0,1 ml работен разтвор на cm 2 мембрана. 5

7 (8) Работният разтвор е стабилен за 24 часа при стайна температура. (9) 5 минути инкубация на потъналата мембрана с работен разтвор на субстрата. (10) Прехвърлете защитеното петно ​​(напр. Увийте в прозрачно фолио без въздушни мехурчета) във филмовата касета с протеина нагоре и поставете филма. Тук трябва да работите в подходяща тъмна стая. По време на експозицията филмът трябва да остане сух. ВАЖНО: Излишният субстрат трябва да се отстрани от петно. Филмът трябва да се поставя внимателно, тъй като поради интензивността на сигнала дори леко плъзгане на филма/петно ​​може да доведе до замъглени или неправилни сигнали. (11) На първо място се препоръчва време на експозиция от 60 s. В зависимост от силата на сигнала, допълнителното време на експозиция за оптимална интензивност на сигнала може да бъде избрано съответно. (12) След това се разработва експонираният филм. (13) Като алтернатива на разработването на филми, откриването може да се извърши и с помощта на подходящи системи за документиране, напр. ProXima C16 Phi +, Isogen. (14) Ако е необходимо, петно ​​може да бъде отстранено след откриване и презаредено с антитела. 6-то

9 4. Информация за поръчка на мембрани Кат. Имобилон (PVDF), 26,5 cm x 3,75 m, размер на порите: 0,2 µm (1 ролка) Fluorobind (PVDF), 10 x 10 cm, размер на порите: 0,2 µm (20 листа) Fluorobind (PVDF), 25 cm x 3 m, размер на порите: 0,2 µm (1 ролка) Protein Standard SERVA Western Blot Protein Standard Reagents Tween Detection Reagents/Kits Хемилуминесцентен реагент за хрян пероксидаза SERVALight Polaris CL HRP WB Substrate Kit SERVALight Eos CL HRP WB Substrate Kit SERVALight Helios CL HRP WB Комплект за подложка