Серологични тестове с помощта на етикета
В момента широко се използват серологични реакции, в които участват маркирани AGs или AT-la. Те включват реакции на имунофлуоресценция, радиоимуноанализ и ензимен имуноанализ.
1) за серодиагностика на инфекциозни заболявания, т.е.за откриване на антигени, използвайки набор от известни конюгирани (химически комбинирани) антигени с различни етикети (ензими, флуорохромни багрила);
2) за идентифициране на микроорганизъм или неговия серовар с помощта на стандартно маркирани диагностични антитела (експресна диагностика).
Серумите се приготвят чрез имунизиране на животни с подходящ AG-m, след това имуноглобулини се изолират и конюгират със светещи багрила (флуорохроми), ензими, радиоизотопи.
Обозначените СР по специфичност не отстъпват на другите СР и по своята чувствителност те надминават всички СР.
Няма свързани материали
Като етикет се използват светещи флуорохромни багрила (флуоросцеин изотиоцианат и др.).
Има различни модификации на RIF. За експресна диагностика на инфекциозни заболявания - за откриване на микроби или техните антигени в тестовия материал се използва RIF според Koons.
Съществуват два метода на RIF според Кунс: директен и индиректен.
Директни RIF компоненти:
1) тестовият материал (движение на червата, назофаринкса и др.);
2) маркиран специфичен имунен серум, съдържащ AT-la към желания антиген;
3) изотоничен разтвор на натриев хлорид.
Намазка от тестовия материал се третира с етикетиран антисерум.
Реакцията AG-AT се осъществява. По време на луминесцентно микроскопско изследване в областта, където са локализирани комплексите AG-AT, се открива флуоресценция - луминесценция.
Индиректни RIF компоненти:
1) изследвания материал;
2) специфичен антисерум;
3) антиглобулинов серум (AT-la срещу имуноглобулин), маркиран с флуорихром;
4) Изотоничен разтвор на натриев хлорид.
Намазка от тестовия материал първо се третира с имунен серум до желания антиген и след това с белязан антиглобулинов серум.
Светещи AG-AT комплекси - маркирани AT се откриват с помощта на флуоресцентен микроскоп.
Предимството на индиректния метод е, че няма нужда да се приготвя широк спектър от флуоресцентни специфични серуми и се използва само един флуоресцентен антиглобулинов серум.
Изолира се и 4-компонентна разновидност на индиректните RIF, когато се добавя допълнително комплемент (серум от морски свинчета). В случай на положителна реакция се образува сложен AG-AT - етикетиран - AT-комплемент.
RIF се основава на комбинацията от антигени на бактерии, рикетсии и вируси със специфични антитела, белязани с флуоресцентни багрила (флуоресцеин изотиоцианат, родамин, В-изоцианит, лисатиндарамин В-200, сулфохлорид и др.), Които имат реактивни групи (сулфиоцианолат и др.) .) ... Тези групи се комбинират със свободни аминогрупи на молекули на антитела, които не губят специфичен афинитет към съответния антиген, когато се третират с флуорохром. Образуваните комплекси AG-AT стават ясно видими, ярко светещи структури под луминесцентен микроскоп (фиг. 7). RIF може да открие малки количества бактериални и вирусни антигени. Методът RIF се използва в две версии: директен и индиректен метод.
Директният метод се основава на директната връзка на антиген с белязано антитяло. Косвен метод се основава на поетапното идентифициране на AG-AT комплекса с използване на флуоресцентни багрила. Първият етап се състои в образуването на имунни комплекси на специфичен антиген със специфични антитела. Вторият етап е да се идентифицира този комплекс, като се третира с белязан антигамаглобулин .
Предимството на RIF е простота, висока чувствителност, бързина за получаване на резултата. RIF се използва като метод за ранна бърза диагностика на грип, дизентерия, малария, чума, туларемия, сифилис и др. За това проучване се използва флуоресцентен микроскоп.
Радиоимуноанализ (RIA)
RIA е един от най-чувствителните методи на имунодиагностика. Използва се за откриване на антигена на вируса на хепатит В при пациенти с вирусен хепатит. За целта към тестовия серум се добавя референтен серум (серум, съдържащ антитела срещу вируса на хепатит В). Сместа се инкубира в продължение на 1-2 дни при 40 ° С, след това се добавя референтният антиген (антиген, белязан с 125 J изотоп) и инкубацията продължава още 24 часа. Към образувания комплекс антиген-антитяло се добавят утаяващи анти-имуноглобулини срещу референтни серумни протеини, което води до образуването на утайка (Фиг. 8). Резултатът се взема предвид от наличието и броя на импулсите в утайката, записани от брояча. Ако в изследвания серум има антиген, който се е свързал със специфични антитела, последните не се свързват с белязания антиген и следователно той не се открива в утайката. По този начин RIA се основава на принципа на конкурентно взаимодействие на антигена, който се определя, и известно количество белязан антиген с активните центрове на антителата.Радиоактивните изотопи се използват като етикет.