Протокол за хронична салмонела, предизвикана от чревна фиброза (преведен на немски)
Обобщение
Този протокол описва миши модел на чревна фиброза, задвижвана от салмонела, която прилича на основните патологични характеристики на болестта на Crohn, включително трансмурално възпаление и фиброза. Този метод може да се използва за оценка на фактори на гостоприемника, които променят фиброзните резултати при мутантни мишки, отгледани на генетичен фон c57Bl/6.
Резюме
Фиброзата на тъканите, която се характеризира с патологичното натрупване на извънклетъчен матрикс като колаген, е резултат от продължително възпаление и нерегулирано възстановяване. При възпалително заболяване на червата (IBD) фиброзата води до повтарящи се стриктурни образувания, за които няма друга ефективна терапия освен хирургична резекция. Поради късното му начало процесите, които задвижват фиброзата, са по-малко изучени и до голяма степен неизвестни. Следователно, фиброзните усложнения представляват основно предизвикателство при IBD.Този протокол описва силен in vivo модел на чревна фиброза, при който предварителната обработка на стрептомицин на мишки C57Bl/6, последвана от орален сонда с дезинфекция. Фиброза на цекума. Обяснени са методи за приготвяне на S. Typhimurium -AroA за ваксинация, количествено определяне на патогенните натоварвания в сляпото черво и далака и оценка на отлагането на колаген в чревните тъкани. Този експериментален модел на заболяването е полезен за изучаване на фактори на гостоприемника, които или обострят, или обострят CD-подобна чревна фиброза.
Въведение
Необходим е абонамент. Моля, препоръчайте JoVE на вашия библиотекар.
Протокол
Всички протоколи за животни са одобрени от Комитета за грижа за животните към Университета на Британска Колумбия.
1. Приготвяне на култури от Salmonella Typhimurium AroA за орална сова на мишки
2. Оценка на замърсяването със салмонела в тъканите
3. Пикросириус Червено оцветяване и количествено определяне на колаген.
Необходим е абонамент. Моля, препоръчайте JoVE на вашия библиотекар.
Представителни резултати
Лечението със стрептомицин, последвано от орална инфекция с S. Typhimurium -AroA, води до силно чревно възпаление и фиброза, особено в цекума (Фигура 1). Типични натоварвания от болести от 10 8 до 10 9 CFU на 1 g цекум и 10 4 CFU на 1 g далак могат да бъдат възстановени от заразени животни (Фигура 2). Оценката на фиброзата при оцветените в червено церкозни срези на пикросириус показва пикова фиброза 21 дни след инфекцията, докато голяма част от патологията се разрешава до 42-ия ден (Фигура 3 и Фигура 4). Отлагането на колаген е най-силно изразено в субмукозата на червата, докато фиброзата е по-лека в лигавицата.
Сегмент 1, който представлява върха на Cecal, може да се използва за анализ на генната експресия, докато сегмент 2 е фиксиран в 10% буфериран формалин за хистология, а сегмент 3 е хомогенизиран за изброяване на бактерии.
CFU на салмонела на тъканно тегло по време на инфекция. Тази цифра е намерена от Lo et al. 26 променени. Моля, кликнете тук, за да видите по-голяма версия на това изображение.
Снимки на светлинно поле от Ceca на незаразени животни и животни 21 и 42 дни след инфекция със S. Typhimurium AroA. Стълб за скала, 200 m. Тази цифра е намерена от Lo et al. 26 променени.
(А.) PSR + оцветяване се нормализира в тъканната област. Значимост, определена от едностранния тест ANOVA Kruskal-Wallis с тест на Dunn's Post. **, Р 0,05. Тази цифра е намерена от Lo et al. 26 променени. (Б.) Пример за количествено определяне на колаген в цекална тъкан с Фиджи. Моля, кликнете тук, за да видите по-голяма версия на това изображение.
Необходим е абонамент. Моля, препоръчайте JoVE на вашия библиотекар.
Дискусия
Необходим е абонамент. Моля, препоръчайте JoVE на вашия библиотекар.
Разкриване
Авторите не трябва да разкриват финансови конфликти на интереси.