Произведено в Германския институт за хранителни изследвания. Изпратено от отдела

Дисертация А. Винченбах, направена в Германския институт за хранителни изследвания, внесена от Катедрата по ветеринарна медицина на Свободния университет в Берлин Изследване на съществеността на живите микроби за насърчаване на хидролизата на чревната лактоза от микробната ß-галактозидаза на ферментирали млечни продукти по модела на гнотобиотичната Гьотингенска миниатюрна дисертация Файл на Doktors: /// g /Sassadat/Diss/UB/winch/index.htm (1 от 6) [07/03/2000 18:54:54]

институт

Дисертация на А. Winchenbach от ветеринарната медицина в Свободния университет в Берлин, представена от ветеринарния лекар на Andrea Winchenbach от Salzhemmendorf Berlin 1998 г. Номер на вестник: 2172 Съдържание Страница 1. Въведение 1 2. Списък на литературата 3 2.1. Малабсорбция на лактоза 3 2.2. Преглед на видовете микроби, използвани при производството на ферментирали млечни продукти 7 2.3. Ss-галактозидазите 8 2.3.1. Чревна (собствена) на ß-галактозидаза 8 2.3.2. Микробната ß-галактозидаза 12 2.4. Толерантност към ферментирали млечни продукти от лактозни малабсорбери 2.5. Убиване на „микроорганизми“ или „лактобацили“ с γ лъчи 13 18 файл: /// g /Sassadat/Diss/UB/winch/index.htm (2 от 6) [03.07.2000 18:54:54]

Дисертация A. Winchenbach 3.3.2. Получаване на лигавични хомогенати с последващо определяне на чревната β-галактозидазна активност в мини-прасето на Göttingen 3.3.3. Получаване на лигавични хомогенати с последващо определяне на чревната β-галактозидазна активност при плъхове 3.3.4. Определяне на активността на ß-галактозидазата и убиването на микроби в суспензии на лактобацили след третиране с йонизиращо лъчение 3.4. Изследване на храносмилането на лактоза и активността на ß-галактозидазата при миниатюрни прасета от гнотобиотик Göttingen 41 42 42 44 3.4.1. Експериментални животни 44 3.4.2. Поддържане 44 3.4.3. Диети 45 3.4.4. Експеримент с хранене 46 3.4.5. Вземане на проби и третиране 47 3.4.6. Стерилни контроли 47 3.5. Изследване на храносмилането на лактоза и активността на ß-галактозидазата при плъхове с гнотобиотици 48 3.5.1. Експериментални животни 48 3.5.2. Поддържане 48 3.5.3. Диети 48 3.5.4. Експеримент с хранене 49 3.5.5. Вземане на проби и третиране 49 3.5.6. Стерилни контроли 49 3.6. Статистическа оценка 50 4. Резултати 51 4.1. Крива на растеж на Lactobacillus delbrückii ssp. bulgaricus 709-1 51 файл: /// g /Sassadat/Diss/UB/winch/index.htm (4 от 6) [03.07.2000 18:54:54]

Дисертация A. Winchenbach 4.8.5. Броят на микробите в диетата и изпражненията на плъхове след прилагане на жизнеспособните лактобацили 73 5. Дискусия 76 5.1. Предварителни тестове 76 5.1.1. Условия за растеж и чистота на щама лактобацили, използван в експеримента 5.1.2. Активност на ß-галактозидаза в проби след in vitro разграждане в смес пепсин/HCl 5.1.3. Активност на лигавичната ß-галактозидаза на лигавицата в тънките черва на мини-прасета и плъхове от Гьотинген 5.1.4. Влияние на облъчването с γ лъчи върху активността на ß-галактозидазата и кълняемостта на Lactobacillus delbrückii ssp. българия 5.2. Количество лактоза, ß-галактозидазна активност и брой на бактериите във фекалиите на гнотобиотични мини-прасета Göttingen след ядене на три различни приготвени диети с кефир 5.3. Количество активност на лактоза, ß-галактозидаза и брой на бактериите във фекалиите на гнотобиотични плъхове след ядене на три различни приготвени кефирни ястия 76 77 79 80 83 90 6. Резюме 92 Резюме 7. Библиография 94 8. Списък на съкращенията 114 9. Приложение 115 Благодарности CV файл: ///g /Sassadat/Diss/UB/winch/index.htm (6 от 6) [07/03/2000 18:54:54]

Дисертация A. Winchenbach - Глава 4: Резултати 4. Резултати 4.1 Крива на растеж на Lactobacillus delbrückii ssp. bulgaricus 709-1 За работата беше от най-голямо значение да се получи възможно най-голям добив на лактобацили с съдържащата се в него ß-галактозидаза. От за Lactobacillus delbrückii ssp. bulgaricus 709-1, подготвена примерна крива на растеж един ден, може да се прочете, че точката, в която лог фазата на растежа на зародиша се променя в стационарна фаза, т.е. Следователно микробите трябва да бъдат събрани и обработени след 14 часа, ако е възможно, за да се получи оптимална маса от живи микроби. Фигура 1 показва кривата за растежа на Lactobacillus delbrückii ssp. bulgaricus 709-1. Фиг. 1: Крива на растеж за Lactobacillus delbrückii ssp. bulgaricus 709-1, отглеждане в MRS бульон при 37 С, посочване на образуващите колонии единици в дневника (виж също раздел 3 в приложението) 4.2. Изпитване на щама лактобацили за чистота файл: /// g/Sassadat/Diss/UB /winch/results.htm (1 от 26) [07/03/2000 18:57:06]

Дисертация A. Winchenbach - Глава 4: Резултати d. При pH 4 и измерване на общата β-галактозидаза (след третиране с ултразвук), обикновено се регистрира намаление в облъчените проби през целия период на измерване. След инкубация при 37 ° С в продължение на 120 минути, все още бяха измерени 519 IU/l в облъчената проба кефир и 543 IU/l в буферната проба. И в двете необлъчени проби (и в двете 1040 IU/l) дори има увеличение на активността над активността от 750 IU/l в началото на инкубацията след 120 минути (ФИГ. 5). Фигура 2: Дейности на свободната ß-галактозидаза в 4 различни проби с лактобацили след инкубация със смес пепсин/HCl при рН 2 (определено с o-npg като субстрат) (вж. Също Таблица 4 в допълнението). неидентифициран/puf. = неизлъчена лактобацилна гранула, ресуспендирана в буфер, unbest./kef. = неизлъчена лактобацилна пелета, ресуспендирана в кефир най-добре./puf. = Лактобацилни пелети, облъчени с 20 kgy resusp. в буферен ред/ключ = Лактобацилни пелети, облъчени с 20 kgy resusp. в кефирен файл: /// g /Sassadat/Diss/UB/winch/results.htm (3 от 26) [07/03/2000 18:57:06]

Дисертация A. Winchenbach - Глава 4: Резултати Фиг. 3: Дейности на свободната ß-галактозидаза в 4 различни проби с лактобацили след инкубация със смес пепсин/HCl при pH 4 (определено с o-npg като субстрат) (вж. Също раздел 5 в приложението). неидентифициран/puf. = неизлъчена лактобацилна гранула, ресуспендирана в буфер, unbest./kef. = неизлъчена лактобацилна пелета, ресуспендирана в кефир най-добре./puf. = Лактобацилни пелети, облъчени с 20 kgy resusp. в буферен ред/ключ = Лактобацилни пелети, облъчени с 20 kgy resusp. в кефирен файл: /// g /Sassadat/Diss/UB/winch/results.htm (4 от 26) [07/03/2000 18:57:06]

Дисертация A. Winchenbach - Глава 4: Резултати Фиг. 4: Дейности на обща ß-галактозидаза в 4 различни проби след инкубация със смес пепсин/HCl при pH 2 (определено с o-npg като субстрат) (вж. Също табл. 6 в приложението). неидентифициран/puf. = неизлъчена лактобацилна гранула, ресуспендирана в буфер, unbest./kef. = неизлъчена лактобацилна пелета, ресуспендирана в кефир най-добре./puf. = Лактобацилни пелети, облъчени с 20 kgy resusp. в буферен ред/ключ = Лактобацилни пелети, облъчени с 20 kgy resusp. в кефирен файл: /// g /Sassadat/Diss/UB/winch/results.htm (5 от 26) [07/03/2000 18:57:06]

Дисертация A. Winchenbach - Глава 4: Резултати от гнотобиотик, но запазени конвенционални) Кривите на хода на активността на лигавичната ß-галактозидаза, показани на фиг. 6 в 6 участъка на тънките черва (измерени при рН 5,5) в 6 мини-прасета в Гьотинген са индивидуални за всяко животно Като цяло обаче може да се установи, че активността в предните отдели на тънките черва е била най-висока до 50% от стомашния изход при почти всички животни, а след това - с изключение на прасетата - намалява горе-долу силно към края. Прасе 6 показва най-високата ß-галактозидазна активност в лигавицата в последния участък на тънките черва. Най-високата активност на мукозната ß-галактозидаза е установена при прасе 4 с 14,24 IU/g лигавица (мокро тегло) при 30% сегмент на тънките черва, последвано от прасе 2 с 13,51 IU/g при 30% и 13,38 IU/g в 50% и от прасе 3 с 13.28 IU/g лигавица (мокро тегло) в 30% тънкочревен участък от стомашния изход. Фигура 6: Активност на ß-галактозидаза по тънките черва при 12-седмични мини-прасета от Гьотинген (6 животни), определяне на 6 различни участъка на тънките черва (определено с лактоза като субстрат; при рН 5,5) (вж. Също Таблица 8 в приложението ). файл: /// g /Sassadat/Diss/UB/winch/results.htm (7 от 26) [07/03/2000 18:57:06]

Дисертация A. Winchenbach - Глава 4: Резултати Фиг. 8: Влияние на условията на облъчване (интензивност и позиция на облъчване) върху активността на ß-галактозидазата в лактобацилни пелети; Определяне на 4 дни в рамките на един месец (позиция на облъчване 3; без ултразвукова обработка; определена с o-npg като субстрат) (виж също Таблица 10 в приложението) Фигура 9: Влияние на условията на облъчване (интензивност на облъчване и позиция) върху ß- Галактозидазна активност в лактобацилни пелети; Определяне на 4 дни за период от един месец (позиция на облъчване 7; без ултразвуково лечение; определя се с o-npg като субстрат) (вж. Също раздел 11 в приложението) файл: /// g/Sassadat/Diss/UB/winch/results. htm (10 от 26) [07/03/2000 18:57:06]

Дисертация A. Winchenbach - Глава 4: Резултати Фиг. 10: Влияние на условията на облъчване (интензивност и позиция на облъчване) върху активността на ß-галактозидазата в лактобацилни пелети; Определяне на 4 дни в рамките на един месец (позиция на облъчване 3; с ултразвукова обработка; определена с o-npg като субстрат) (виж също Таблица 12 в приложението) Фиг. 11: Влияние на условията на облъчване (интензивност на облъчване и позиция) върху ß- Галактозидазна активност в лактобацилни пелети; Определяне на 4 дни за период от един месец (облъчване позиция 7; с ултразвуково лечение; определя се с o-npg като субстрат) (виж също Таблица 13 в приложението) файл: /// g/Sassadat/Diss/UB/winch/results. htm (11 от 26) [07/03/2000 18:57:06]