Профил на миозит - петно - Synevo
Информирамтii общи и препоръки за определяне на профила на миозит
Идиопатичните възпалителни миопатии са група състояния, характеризиращи се със слабост на проксималните мускули на крайниците, мускулна атрофия, биохимични и електромиографски признаци на мускулно увреждане, хистологични аномалии, характерни кожни промени. Те се срещат с честота от 0,1-1/100 000 жители/година и са по-чести при жените. Тази група включва: полимиозит, дерматомиозит, миозит с включени тела, миозит, свързан с неоплазия (паранеопластичен синдром) и миозит, свързан с други заболявания на съединителната тъкан 6; 7 .
Както при системната склероза, специфичните автоантитела играят основна роля в диагностиката и класификацията на различни варианти на тези състояния (включително припокриващи се синдроми), особено след като разпространението на антинуклеарните антитела е значително ниско (40-60%) в сравнение с лупуса. системен еритем. Тези автоантитела разпознават множество антигенни цели: трансфер на типове РНК (tRNAs), аминоацил-t-RNA синтетази, компоненти за разпознаване на сигнали (SRP), транслационни фактори, компоненти на ремоделиращия комплекс. нуклеозома, но най-важни са тези, насочени срещу аминоацил-t-РНК синтетазите (семейство ензими, открити във всички ядрени клетки и което има ролята на свързване на определена аминокиселина със собствената си тРНК). Наличието на автоантитела е свързано с определени подмножества на заболяването, имащо прогностична стойност за различни клинични прояви и за прогноза на заболяването 1; 2; 6; 7 .
Антитела срещу Jo-1 са насочени срещу ензима хистидил-t-РНК синтетаза. In vitro тези автоантитела се свързват с конформационните епитопи на ензима и инхибират неговата каталитична активност. Антигенът е в димерна форма и се намира в цитоплазмата; молекулната маса на субединиците е 50 kDa. Разпространението на антитела срещу Jo-1 при полимиозит и дерматомиозит е 20-40%; автоантитела могат да бъдат открити рано, понякога предхождащи появата на симптомите. При децата антителата срещу Jo-1 са изключително редки. Пациентите с антитела срещу Jo-1 имат типична триада от симптоми: полимиозит (> 90%), полисиновит (артралгии, нерозивен деформиращ артрит, теносиновит в 50% от случаите), фиброзиращ алвеолит или белодробна фиброза (60%). Можем да добавим също: феномен на Рейно (40%), треска (20%), „ръка на механика“ (30%). Това състояние е известно като синдром на антисинтетазата. Повече от 90% от пациентите от Кавказка с анти-Jo-1 имат алела HLA DR3 1; 4; 6; 7 .
Въпреки че антитела, насочени към други аминоацил-t-РНК синтетази: анти-PL-7 (синтез на антитреонил-t-РНК), анти-PL-12 (анти-аланил-t-РНК синтетаза), анти-EJ (анти-глицил-t-РНК синтетаза) и анти-OJ (анти-левцил-t-РНК синтетаза) са много по-рядко срещани от анти-Jo-1, те са свързани със същите клинични прояви, съвместими с синтетаза 6. Обикновено пациентът има само един вид антисинтетазни антитела, но са описани и случаи, в които са открити всички 5 автоантитела. Синдромът на анти-синтетазата реагира умерено на терапията с кортизон. Тъй като всички синтетази се намират в цитоплазмата (мястото на синтеза на протеини), автоантителата причиняват фина цитоплазмена поява при индиректна имунофлуоресценция, като използват Hep-2 клетки като субстрат. .
Анти-PL-7 се срещат с преобладаване 3-6% при пациенти с миозит, особено при припокриващи се синдроми (SLE, системна склероза, интерстициална белодробна фиброза).
Анти-PL12 се откриват с разпространение 3% при пациенти с миозит.
Anti-EJ и анти-ОВ се срещат при полимиозит, но също така и при синдроми на припокриване 3 .
Анти-Mi-2 антитела са насочени срещу ядрена хеликаза (ядрен протеинов комплекс, участващ в регулацията на транскрипцията); се срещат при 15-30% от пациентите с дерматомиозит (имащи висока специфичност за това състояние) и рядко при пациенти с полимиозит. Повечето пациенти с антитела срещу Mi-2 носят алела HLA DR7. Формата на заболяването е доброкачествена, с добър отговор на терапия с кортизон 6; 7 .
Антитела срещу Ku са насочени срещу хетеродимерен тип нуклеоларен протеинов антиген, съставен от две субединици с молекулно тегло съответно 70 и 80 kDa, компонент на ДНК-зависим протеинкиназен ензимен комплекс. Този комплекс играе важна роля в клетъчните процеси, свързани с транслацията, възстановяването на ДНК и пренареждането на гени, участващи в синтеза на имуноглобулини, както и Т-клетъчни рецептори. особено припокриващи се синдроми на склеродермия-миозит, но също и СЛЕ (3-10%). Появата при индиректната имунофлуоресценция е от гранулиран тип (петнист); Описана е и връзка с алела HLA DQw1. Разпространението на анти-Ku антитела при автоимунни заболявания е променливо, като етническата принадлежност е важен елемент. Например, случаи на СЛЕ, свързани с антитела срещу Ku, са докладвани в Северна Америка и Европа, но не и в Япония. Първичният синдром на Sjögren, както и първичната белодробна хипертония, са други клинични състояния, често свързани с анти-Ku.
Антитела срещу PM-Scl са насочени срещу нуклеоларния комплекс, съставен от 11-16 полипептиди, чиято функция все още не е определена 6. Антителата се откриват в над 90% от случаите на синдром на припокриване на склеродерма-полимиозит (склеродерматомиозит), но само при
8% от всички случаи на миозит и
3% от всички случаи на склеродермия 5. Прогнозата е относително благоприятна при тази група пациенти. Той се свързва с HLA DR3 и анти-ядрените антитела с хомогенен ядрено-ядрен вид при имунофлуоресценция 2; Двете основни автоантитела се откриват отделно в лабораторията: анти PM-Scl100 и анти PM-Scl75 3 .
Анти-SRP ("Частица за разпознаване на сигнала") реагира с 54 kDa компонент на комплекса SRP, който медиира транспорта на новосинтезирани протеини до ендоплазмения ретикулум. Те са описани при пациенти с полимиозит и дерматомиозит (до 4% от случаите), особено при чернокожи жени. Анти-SRP са маркери за некротизираща миопатия, характеризираща се с тежка проксимална и симетрична остра слабост на скелетната мускулатура, свързана с мускулна болка; засегнат е и сърдечният мускул. Болестта се свързва с повишена смъртност и лош отговор на терапия с кортизон 6; 7 .
Анти-Ro52 са насочени срещу 52kDa антиген и са описани като неспецифични автоантитела, свързани с ревматични и неревматични заболявания. Те присъстват на 100% при майките на фетуси или новородени с вроден атриовентрикуларен блок или неонатален лупус 6. Определен процент от пациентите с полимиозит/дерматомиозит имат анти-Ro52 в комбинация с антитела срещу аминоацил-t-РНК синтетаза (особено анти-Jo-1) 1; 2 .
Обучение на пациента - à jeun (на гладно) или след хранене (след хранене) 3.
Събран образец - венозна кръв 3 .
Контейнер за прибиране на реколтата Вакутейнер без антикоагулант със/без отделящ гел 3 .
Необходима е обработка след прибиране на реколтата - отделете серума чрез центрофугиране 3 .
Обем на пробата - минимум 1 ml ser 3 .
Причини за отхвърляне да опиташ
Стабилност на пробата - отделеният серум е стабилен 14 дни при 2-8 ° C и дълго време при -20 ° C. Не размразявайте/замразявайте 3 .
Метод - имуноблот. Използваните антигени са нативни (Jo-1) и рекомбинантни.
Лентите се състоят от мембранни чипове, фиксирани с различни пречистени антигени: Mi-2, Ku, PM-Scl 100, PM-Scl 75, Jo-1, SRP, PL-7, PL-12, EJ, OJ, Ро-52.
В първия етап лентата, заредена с пречистени антигени, се инкубира заедно с разредения серум на пациента. Ако в серума присъстват специфични антитела, те ще се свържат със съответните антигени на лентата. След етап на измиване, лентата се инкубира с белязан с алкална фосфатаза човешки анти-IgG конюгат. Конюгатът ще се прикрепи към IgG частта от комплекса антиген-антитяло. След измиване несвързаният конюгат се отстранява, добавя се оцветяващият разтвор (ензимен субстрат) - колориметрична система за откриване на ензими. Ако присъства свързаният конюгат, ензимната реакция ще генерира тъмносин оцветен продукт в лентите, заети от специфични антитела. По този начин, лентите, визуализирани на нивото на лентата, са резултат от свързването на специфични антитела с отделните антигени на ниво лента.
На всяка лента има вътрешна контролна лента. Появата на интензивна цветна реакция на това ниво удостоверява, че всички етапи от теста за имуноблот са проведени правилно 3 .
Окончателната интерпретация на резултатите от теста се извършва с помощта на софтуер (след сканиране на лентите), който в зависимост от интензивността на сигнала дава оценка за всяка лента на лентата, както следва:
ОЦЕНКА НА СИГНАЛА
ИНТЕНСИВНОСТ НА СИГНАЛА
Референтни стойности