Phospho-Smad2 (Ser465467) Smad3 (Ser423425) (D27F4) Rabbit mAb

Western blot анализ на екстракти от HaCaT клетки, необработени (-) или третирани с hTGF-β3 # 8425 (+) в отсъствието или присъствието на TGFR инхибитора SB 431542, като се използва Phospho-Smad2 (Ser465/467)/Smad3 (Ser423/425) (D27F4) Rabbit mAb (горна) или Smad2/3 (D7G7) XP ® Rabbit mAb # 8685 (долна).

Phospho-Smad2 (Ser465/467)/Smad3 (Ser423/425) (D27F4) Rabbit mAb 8828

smad3

Western blot анализ на екстракти от HaCaT клетки, необработени (-) или третирани с hTGF-β3 # 8425 (+) в отсъствие или присъствие на инхибитора на TGFR SB 431542, като се използва Phospho-Smad2 (Ser465/467)/Smad3 (Ser423/425) (D27F4) Rabbit mAb (горна) или Smad2/3 (D7G7) XP ® Rabbit mAb # 8685 (долна).

  • Вашият местен представител
  • Вашата местна информация за покупка
  • Гаранция за антитела
  • ЧЗВ
  • Техническа поддръжка
  • Сертификат за анализ
  • Поддържащи данни
  • Свързани продукти
  • Използване на продукта
  • Протоколи
  • Заден план
  • Пътеки и протеини
  • Цитати и рецензии

Поддържащи данни

РЕАКТИВНОСТ H M R Mk
ЧУВСТВИТЕЛНОСТ Ендогенни
MW (kDa) 52, 60
Източник/изотип Заешки IgG

Ключ за приложение:

  • W.-Уестърн
  • IP-Имунопреципитация
  • IHC-Имунохистохимия
  • Чип-Хроматин имунопреципитация
  • АКО-Имунофлуоресценция
  • F.-Проточна цитометрия
  • E-P-ELISA пептиди

Ключ за кръстосана реактивност на видовете:

  • З.-Човек
  • М.-Мишка
  • R.-съвет
  • Хм-хамстер
  • Mk-Маймуна
  • Ср-Норка
  • ° С.-Пиле
  • Dm-D. melanogaster
  • х-Ксенопус
  • Z.-Риба зебра
  • Б.-Говеда
  • Dg-Куче
  • Стр-Прасе
  • Sc-S. cerevisiae
  • Ce-C. elegans
  • г-н-Кон
  • Аллес-Всички видове се очакват
Smad2/3 (D7G7) XP® Rabbit mAb # 8685
Smad2/3 Антитела # 3102
Smad2 (D43B4) XP® Rabbit mAb # 5339
Smad2/3 Антитела # 5678
Phospho-Smad3 (Ser423/425) (C25A9) Rabbit mAb # 9520
Phospho-Smad1 (Ser463/465)/Smad5 (Ser463/465)/Smad9 (Ser465/467) (D5B10) Rabbit mAb # 13820
Phospho-Smad2 (Ser465/467) (138D4) Rabbit mAb # 3108
Smad3 (C67H9) заешки mAb # 9523
Phospho-Smad1/5 (Ser463/465) (41D10) Rabbit mAb # 9516
Phospho-SMAD2 (Ser465/Ser467) (E8F3R) Rabbit mAb # 18338

Информация за употреба на продукта

Съхранение

Доставя се в 10 mM натриев HEPES (рН 7,5), 150 mM NaCl, 100 µg/ml BSA, 50% глицерол и по-малко от 0,02% натриев азид. Съхранявайте при -20 ° C. Не аликвотирайте антитялото.

Протокол

Западен протокол за петна

За Western blots, инкубирайте мембрана с разредено първично антитяло в 5% w/v BSA, 1X TBS, 0,1% Tween® 20 при 4 ° C с леко разклащане, за една нощ.

ОЦЕНКА: Моля, направете справка с уеб страницата на продукта с първични антитела за препоръчително разреждане на антитела.

А. Разтвори и реактиви

От подготовката на пробата до откриването, реагентите, от които се нуждаете за вашия Western Blot, сега са в един удобен комплект: # 12957 Western Blotting Application Solutions Kit

ОЦЕНКА: Пригответе разтвори с дейонизирана обратна осмоза (RODI) или еквивалентна вода.

Б. Протеиново попиване

Общ протокол за подготовка на пробите.

  1. Третирайте клетките, като добавите прясна среда, съдържаща регулатор за желаното време.
  2. Аспиративни медии от култури; измийте клетки с 1X PBS; аспирирам.
  3. Лизират клетките чрез добавяне на 1Х SDS пробен буфер (100 µl на гнездо с 6-гнездна плака или 500 µl за 10 cm диаметър на плоча). Веднага изстържете клетките от плочата и прехвърлете екстракта в епруветка за микроцентрифуга. Дръжте на лед.
  4. Ултразвук за 10-15 секунди за завършване на клетъчния лизис и срязване на ДНК (за намаляване на вискозитета на пробата).
  5. Загрейте 20 µl проба до 95-100 ° С за 5 минути; хладно на лед.
  6. Микроцентрифуга за 5 минути.

Заредете 20 µl върху SDS-PAGE гел (10 cm x 10 cm).

КЛАС: Препоръчва се зареждане на предварително прецизирани маркери за молекулно тегло (# 13953, 5 µl/лента) за проверка на електротрансфера и биотинилирана протеинова стълба (# 7727, 10 µl/лента) за определяне на молекулни тегла.

  • Електротрансфер на нитроцелулозна мембрана (# 12369).

    • В. Мембранно блокиране и инкубации на антитела

    ОЦЕНКА: Обемите са за 10 см х 10 см (100 см 2) мембрана; за мембрани с различен размер, регулирайте силата на звука съответно.

    I. Блокиране на мембраната

    1. (По избор) След прехвърляне, измийте нитроцелулозната мембрана с 25 ml TBS за 5 минути при стайна температура.
    2. Инкубирайте мембраната в 25 ml блокиращ буфер за 1 час при стайна температура.
    3. Измийте три пъти по 5 минути всеки с по 15 ml TBST.

    II. Първична инкубация на антитела

    1. Инкубирайте мембраната и първичното антитяло (при подходящо разреждане и разредител, както се препоръчва в уеб страницата на продукта) в 10 ml буфер за разреждане на първично антитяло с леко разбъркване за една нощ при 4 ° C.
    2. Измийте три пъти по 5 минути всеки с по 15 ml TBST.
    3. Инкубирайте мембрана с анти-заешки IgG, HRP-свързано антитяло (# 7074 при 1: 2000) и анти-биотин, HRP-свързано антитяло (# 7075 при 1: 1000–1: 3000) за откриване на биотинилирани протеинови маркери в 10 ml блокиращ буфер с леко разбъркване в продължение на 1 час при стайна температура.
    4. Измийте три пъти по 5 минути всеки с по 15 ml TBST.
    5. Продължете с откриването (раздел D).

    Г. Откриване на протеини

    Указания за употреба:

    1. Измийте HRP, свързан с мембрана (конюгат на антитела) три пъти за 5 минути в TBST.
    2. Пригответе 1X SignalFire ™ ECL реагент (# 6883), като разредете една част 2X реагент A и една част 2X реагент B (например за 10 ml, добавете 5 ml реагент A и 5 ml реагент B). Смесете добре.
    3. Инкубирайте субстрата с мембрана за 1 минута, отстранете излишния разтвор (мембраната остава мокра), увийте в пластмаса и изложете на рентгенов филм.

    * Избягвайте многократно излагане на кожата.

    публикувано през юни 2005 г.

    ревизиран юни 2020 г.

    Специфичност/чувствителност

    Phospho-Smad2 (Ser465/467)/Smad3 (Ser423/425) (D27F4) Rabbit mAb разпознава ендогенни нива на Smad2 протеин, когато се фосфорилира при Ser465 и Ser467. Това антитяло също така разпознава ендогенни нива на Smad3 протеин, когато фосфорилира само Ser422 или както при Ser423, така и при Ser425.

    Видова реактивност:

    Човек, мишка, плъх, маймуна

    Източник/Пречистване

    Моноклонално антитяло се получава чрез имунизиране на животни със синтетичен пептид, съответстващ на остатъци около Ser465/467 от човешки протеин Smad2.

    Заден план

    Членовете на семейството на Smad от молекули за трансдукция на сигнали са компоненти на критичен вътреклетъчен път, който предава TGF-β сигнали от клетъчната повърхност в ядрото. Дефинирани са три различни класа Smads: рецепторно регулирани Smads (R-Smads), които включват Smad1, 2, 3, 5 и 8; общият медиатор Smad (съ-Smad), Smad4; и антагонистичните или инхибиторни Smads (I-Smads), Smad6 и 7 (1-5). Активираните тип I рецептори се свързват със специфични R-Smads и ги фосфорилират върху запазен карбокси-краен SSXS мотив. Фосфорилираният R-Smad се дисоциира от рецептора и образува хетеромерен комплекс с ко-Smad (Smad4), позволявайки транслокация на комплекса към ядрото. Веднъж попаднали в ядрото, Smads могат да се насочат към различни ДНК-свързващи протеини, за да регулират транскрипционните отговори (6-8).

    Пътеки и протеини

    Изследвайте пътищата + протеини, свързани с този продукт.