Ортотопичен модел на рак на ендометриума с ретроперитонеална лимфаденопатия, направен от In Vivo
Обобщение
Този протокол предоставя стандартизиран метод за отглеждане на VX2 клетки в култура и за създаване на ортотопичен VX2 модел на рак на ендометриума с метастази в ретроперитонеални лимфни възли при зайци. Моделите на ортотопичния рак на ендометриума са важни за предклиничното изследване на нови образни методи за диагностика на метастази в лимфните възли.
Резюме
Ракът на ендометриума е най-често срещаното гинекологично злокачествено заболяване в Северна Америка и честотата се увеличава в световен мащаб. Лечението се състои от операция със или без адювантна терапия в зависимост от засягането на лимфните възли, както се определя от лимфаденектомия. Лимфаденектомията е болестна процедура, която няма терапевтична полза при много пациенти и поради това е необходим нов метод за диагностициране на метастази в лимфните възли. За да се тестват нови образни агенти, е необходим надежден модел на рак на ендометриума с метастази в ретроперитонеални лимфни възли. Моделът на VX2 ендометриален карцином е широко описан в литературата; Съществуват обаче съществени разлики в метода за настройка на модела. Освен това не са докладвани проучвания за използването на култивирани VX2 клетки за създаване на този модел, тъй като досега са използвани само клетки, размножаващи се in vivo. Представяме стандартизиран хирургичен метод и следоперативен метод за наблюдение за установяване на модел на рак на ендометриума VX2 и докладваме за първото използване на култивирани VX2 клетки за създаване на този модел.
Въведение
Няколко групи съобщават за използването на VX2 за моделиране на рак на ендометриума с ретроперитонеални метастази с висок докладван процент на успех 36, 51, 52; В настоящата литература обаче има значителни разлики в метода за изграждане на модели. Съобщава се за дози от клетъчни суспензии до 4 х 105 клетки/маточен рог 51 и до 5 х 109 клетки/маточен рог 37, 53, без стандартен консенсус относно необходимата доза VX2 клетки. Съобщени са и различни методи за ваксинация, включително микрохирургично имплантиране на тумори в маточния миометриум 36, инжектиране на VX2 клетъчна суспензия 37, 44, 52, 53 и, в някои случаи, добавяне на конци на рога на матката преди инокулация 52. И накрая, нито една група не е съобщила за използването на култивирани VX2 клетки за създаване на този модел. Така че целта на това проучване е да демонстрира успешен стандартизиран метод за моделиране на VX2 и да докладва за първото използване на култивирани VX2 клетки за моделиране на рак на ендометриума с ретроперитонеални метастази при заек.
Необходим е абонамент. Моля, препоръчайте JoVE на вашия библиотекар.
Протокол
Дълбоко запушване на коремната стена: Идентифицирайте върха на перитонеалния разрез и хванете перитонеума, ректусния мускул и фасциите с тъканни форцепс. Всички проучвания върху животни са проведени в одобрените от Центъра за животински ресурси (ARC) университетски здравни мрежи и в съответствие с одобрените протоколи за употреба и грижи за животните (AUP # 3994/# 4299). Клетъчната линия VX2 е получена от Dr. Лабораторията на Aken в университетската здравна мрежа спечели.
1. Изграждане на in vitro VX2 клетъчна линия
2. VX2 клетъчна култура и образуване на клетъчна суспензия
3. Настройка на хирургически модел
Необходим е абонамент. Моля, препоръчайте JoVE на вашия библиотекар.
Представителни резултати
С помощта на нов образен агент Porphyso бяха идентифицирани интраоперативно и хирургично отстранени 81 лимфни възли за хистологичен анализ. 74 лимфни възли бяха леви тазови лимфни възли, 5 бяха десни тазови лимфни възли и 2 бяха десни пара-аортни лимфни възли. Лимфните възли, отстранени от зайци с in vivo размножени VX2 тумори, са значително по-големи и по-некротични от тези, отстранени от зайци с култивирани VX2 тумори със среден обем от 0,99 cm 3 (диапазон от 0,12-3,89 ) в сравнение с 0,59 cm3 (0,01 - 2,92) (p = 0,037). Зайци с тумори, размножаващи се in vivo, също са имали по-големи некротични тумори на матката, отколкото зайци с култивирани клетъчни тумори със средна дължина 5,6 cm (4-6,8 cm) и средна ширина 5,2 cm (3,3-9 cm) срещу 3,6 см (2-5 см) или 4,56 см (3-7 см). И накрая, заешки модели от VX2 клетки, размножаващи се in vivo, са имали повече извънвъзлови коремни метастази, отколкото заешки модели от култивирани клетки с 91% от всички метастази, открити при зайци, размножаващи се in vivo.
| Тип на модела | In vivo VX2 туморен модел | Култивиран VX2 туморен модел |
| Брой успешни модели | 16. | 5 |
| Брой изпробвани модели | 22 * | 8-ми |
| Процент на успех на модела | 73% | 63% |
| Време от ваксинацията до експеримента | 29 дни (24-31) | 45 дни (36-51) |
| Успешна инжекционна доза | 1 x 10 7 | 40 х 10 6 |
| (5x10 6 на маточен рог) | (20 х 106 на маточен рог) | |
| Общ процент на успех | 75% | |
| Общ процент на успех преди маточния шев | 57% | |
| Общ процент на успех след зашиване на матката | 81% | |
Таблица 1: Данни от модела, включително експериментални условия, брой използвани животни и степен на успех. Два зайци, първоначално използвани за култивирани клетъчни тумори, които не успяха да растат, бяха използвани по-късно за in vivo туморни модели
Необходим е абонамент. Моля, препоръчайте JoVE на вашия библиотекар.
Дискусия
Тук докладвахме стандартизиран хирургичен метод за установяване на модел на рак на ендометриума VX2 и докладвахме за първата употреба на култивирани VX2 клетки за създаване на този модел. Скоростта на поемане на тумори от 75% е по-ниска от 100% процента, съобщена по-рано в литературата 35, 37, 53, 56; честотата на патологично потвърдените метастази в лимфните възли е 90% в съответствие с предишни проучвания на този модел 35, 53 .
Като цяло, ние докладвахме прост, стандартизиран метод за моделиране на рак на ендометриума с ретроперитонеална лимфаденопатия при зайци. С този протокол сме обърнали внимание на значителната променливост в литературата за VX2 по отношение на клетъчната доза, хирургичната техника и следене на следоперативния модел. Разбираме, че друго ограничение на изследването е, че когато използваме VX2 клетъчна линия вместо човешки ксенографт, ние не имитираме напълно туморната биология и микросредата на човешкия рак. Надяваме се обаче, че други групи ще използват култивирани VX2 клетки за изграждане на своите модели, тъй като вярваме, че този тип клетки могат да моделират по-надеждно човешкия рак на ендометриума поради по-бавния си растеж и намалената склонност към метастатично-метастатично заболяване. Ние насърчаваме други групи да използват този бърз и лесен модел на метастази в ретроперитонеални лимфни възли, получени от матката, за да изследват нови образни терапии, за да помогнат на пациенти с метастатичен рак на ендометриума.
Необходим е абонамент. Моля, препоръчайте JoVE на вашия библиотекар.
Разкриване
Авторите няма какво да разкрият.
Благодарности
Това проучване е финансирано от Изследователския институт на Тери Фокс (PPG-1075), Канадския институт за здравни изследвания (Фонд за безвъзмездна помощ # 154326), Канадския институт за изследване на рака (704718), Съвет за природни науки и инженерни изследвания на Канада, Фондация за иновации и Фондация „Рак на принцеса Маргарет“.
Искам д-р Благодарим на Marguerite Akens за предоставянето на първите VX2 клетки за създаването на оригиналния модел VX2 и замразени туморни блокове VX2. Бих искал да благодаря на Марко ДиГрапа за подкрепата при провеждането на първите експерименти с клетъчна култура VX2 и Лили Динг за подкрепата с клетъчната култура VX2.