Мускулна дистрофия на DuchenneBecker (делеции на MLPA делеция) - Synevo
Главна информация
Дистрофинопатиите включват спектър от мускулни заболявания, причинени от мутации в DMD гена, който кодира дистрофина. Клиничните форми на заболяването имат различна тежест и показват предаване, свързано с Х хромозомата; най-леките фенотипове включват асимптоматично повишаване на активността на серумната креатин киназа, мускулни крампи, придружени от миоглобинурия, и изолирана квадрицепсова миопатия; на противоположния полюс са прогресивните мускулни разстройства, класифицирани в две широки категории: Мускулна дистрофия на Дюшен/Бекер, когато скелетните мускули са засегнати главно, и разширена кардиомиопатия, свързана с DMD мутации, когато увреждането на сърцето е на преден план 1 .
През 1986 г. Кункел идентифицира гена на мускулната дистрофия на Дюшен като локализиран в лентата Xp21 и по този начин потвърждава начина на предаване на болестта, свързана с Х.
Мускулната дистрофия на Бекер има разпространение от 24 случая на 1 милион и също има предаване, свързано с хромозомата X. Фенотипът се генерира от генетични мутации, различни от тези, участващи в болестта на Дюшен, но засегнатият ген е често срещан (DMD). Дистрофията на Бекер започва клинично в по-напреднала възраст и има по-бавен клиничен ход. Обездвижването в инвалидна количка настъпва след 20-годишна възраст; Въпреки че увреждането на скелетните мускули е по-малко тежко, отколкото при болестта на Дюшен, сърдечната недостатъчност, причинена от разширена кардиомиопатия, е основна причина за заболеваемост и смъртност.
В резултат на предаването, свързано с Х, болестта на Дюшен и болестта на Бекер се срещат почти изключително при момчетата. Много рядко жените с DMD мутации развиват фенотипа на Дюшен/Бекер в резултат на случайно инактивиране на незасегнатата Х хромозома, асоциирането на синдрома на Търнър (X0) или еднородствена дизомия. По този начин в повечето случаи жените са безсимптомни и две трети от тях показват повишаване на активността на креатин киназата 4 .
Разширената кардиомиопатия, свързана с генни мутации на DMD, се характеризира с дилатация на лявата камера и застойна сърдечна недостатъчност. При мъжете заболяването започва клинично на възраст между 20 и 40 години и има бърза летална еволюция, докато при жените има по-късно начало и по-бавна прогресия. Признаци и симптоми на увреждане на скелетните мускули обикновено липсват.
DMD е единственият ген, свързан с дистрофинопатии. Тестовете за молекулярна биология, които откриват DMD мутации, могат да диагностицират в повечето случаи дистрофия на Дюшен или Бекер, без да е необходима мускулна биопсия. Теоретично всички пациенти от мъжки пол с дистрофия на Дюшен и поне 85% от тези с дистрофия на Бекер имат идентифицируеми DMD мутации. Броят на пациентите с разширена кардиомиопатия и идентифицируеми DMD мутации е неизвестен. В останалите случаи потвърждението на клиничните данни с фамилната анамнеза, нивото на серумната креатин киназа, мускулната биопсия и дистрофиновия анализ потвърждават диагнозата 1 .
DMD е най-големият ген, идентифициран в човешкия геном; тя се състои от 79 екзона и има висока степен на мутация; изразява се главно в скелетните, гладките и сърдечните мускули. Кодираният протеин - дистрофин - участва в механичната връзка между извънклетъчния матрикс и клетъчния цитоскелет. При липса на дистрофин се засяга целостта на сарколемата и се нарушава стабилността на мускулното влакно. Тъй като податливостта към механични наранявания се увеличава, мускулните влакна ще претърпят многократни цикли на некроза и регенерация с евентуално изчерпване на регенеративния капацитет. DMD мутациите, които причиняват или пълното отсъствие на дистрофин, или производството на пресечен протеин, са свързани с фенотипа на Дюшен. От друга страна, мутациите, които засягат средната област на гена, ще генерират по-кратък протеин, който обаче запазва своите карбокси- и аминотерминални домени и по този начин своята функционалност; те са свързани с фенотипа на Бекер 2; 4 .
Големите делеции, включващи един или повече екзони, са отговорни за приблизително 59% от случаите на болестта на Дюшен и 65% от случаите на дистрофия на Бекер. Мутации, които предизвикват преждевременната поява на стоп кодон, се откриват в 15% от случаите и дублиране в 5% от случаите; в останалите случаи има мутации на рамката за четене, вмъквания/изтривания, мутации на мястото на сплайсинг, както и пропускащи мутации.
Въпреки че почти всички случаи на дистрофия на Дюшен или Бекер се предават Х-свързани, в една трета от случаите няма фамилна анамнеза, като са de novo мутации. Мозаицизмът на гонадите е отговорен за приблизително 20% от новите случаи на мускулна дистрофия на Дюшен 4 .
Рискът от заболяване на братята и сестрите на засегнатото лице зависи от състоянието на носителя на майката. Поради X-свързаното предаване на дистрофинопатии, жените с 50% риск от предаване на DMD мутацията при всяка бременност. Синовете, наследяващи мутацията, винаги ще бъдат засегнати, докато дъщерите, наследяващи мутацията, ще бъдат носители и могат или не могат да развият кардиомиопатия.
Обикновено мъжете с дистрофия на Дюшен умират преди репродуктивна възраст, докато мъжете с фенотип Бекер могат да се размножават, така че всичките им дъщери ще наследят болестотворната мутация и техните синове няма да бъдат засегнати.
Лелите по майчина линия на засегнатото лице, както и техните деца, могат да бъдат изложени на повишен риск да се разболеят или да станат носители в зависимост от техния пол, семейни отношения и статуса на майката на носител.
Жена със засегнат син и друг майчина засегнат роднина трябва да бъде хетерозиготна за DMD мутация.
Жена с повече от един засегнат син и негативна фамилна анамнеза има или мутация на зародишна линия (причиняващата болестта мутация на DMD присъства във всичките й клетки) или мозаицизъм на половите жлези (налице е мозайката за причиняваща болест мутация на DMD). само в зародишната линия).
Ако детето със състояние на Дюшен/Бекер е единственият засегнат член на семейството, трябва да се имат предвид няколко възможности, свързани със статуса на майката на носител:
а) засегнатият син има de novo мутация, която е резултат от:
б) майката има мутация de novo; около две трети от майките на момчета с дистрофия на Дюшен/Бекер и без фамилна анамнеза носят мутации на DMD; механизмите, чрез които възникват de novo мутации при майката, са следните:
в) майката е наследила мутация от:
Генетичните тестове, съчетани с анализ на връзката, често могат да определят произхода на de novo мутация. Този анализ е важен за идентифициране на семейния клон, който е с повишен риск от дистрофинопатия 1 .
Разработени са няколко техники за молекулярна биология за откриване на мутации на DMD гени в проби от периферна кръв, включително:
-
мултиплекс PCR за откриване на заличавания (степен на откриване
95%);
Техниката MLPA за гена DMD изисква два различни типа реакции поради големия брой екзони. Една реакция включва смес от сонди, наречена PO34, покриваща екзони 1-10, 21-30, 41-50 и 61-70. Втората реакция съдържа смес от сонди, наречена PO35, която обхваща анализа на екзони 11-20, 31-40, 51-60 и 71-79. Проучванията показват, че тази техника, която „сканира“ всички 79 екзона на гена DMD едновременно за наличие на делеции/дублирания, е полезно диагностично средство както за засегнатите мъже, така и за жени носители 2; .
Препоръки за генетично изследване
- потвърждение на диагнозата дистрофия на Дюшен/Бекер при засегнатите лица;
- тестване на високорискови роднини за идентифициране на жени носители; идеално е да се идентифицира предварително болестотворна мутация в семейството;
- пренатална диагностика при високорискови бременни жени за DMD мутация; се извършва чрез анализ на ДНК, извлечена от фетални клетки, получени чрез амниоцентеза, обикновено се извършва на около 15-18 гестационна седмица или биопсия на хорионни ворси, на около 10-12 гестационна седмица; мутациите, причиняващи заболяването, трябва да бъдат идентифицирани преди пренаталното тестване 1, 3, 4 .
Събран образец - кръвта ще дойде 3 .
Контейнер за прибиране на реколтата - вакуутан, съдържащ EDTA като антикоагулант 3 .
Количество реколта - 5 ml кръв 3 .
Причини за отхвърляне да опиташ - използване на хепарин като антикоагулант; коагулирани или хемолизирани проби 3 .
Тествайте стабилността - 7 дни при 2-8ºC 3 .
Начини - анализ на заличаване/дублиране на MLPA 3 .
Докладване и интерпретиране на резултатите
Делеции/дублирания, открити в гена DMD, и тяхната асоциация с фенотип на Дюшен/Бекер ще бъдат съобщени според данните от литературата 3 .
Идентифицирането на болестотворна мутация при мъж със сугестивна клинична картина и повишени нива на СК потвърждава диагнозата. Фенотипите на Дюшен/Бекер най-добре корелират със степента на експресия на дистрофин, която се определя от рамката за четене на РНК-съобщението, получена от мутантния алел. По този начин, много големи делеции могат да доведат до липсата на експресия на дистрофин; също така някои заличавания и дублирания могат да променят рамката на четене и да предизвикат производството на силно пресечен протеин, който е свързан с фенотипа на Дюшен. Фенотипът на Бекер се развива, когато се поддържа определено производство на дистрофин, което частично запазва неговата функция; в тези случаи става въпрос за изтривания или дублирания, които съпоставят някои екзони на нивото на рамката за четене.
В семейства, в които засегнатият мъж има известно изтриване или дублиране на DMD, тази промяна се търси и при роднини с висок риск. Липсата на промяна изключва статуса на превозвача. Идентифицирането на DMD мутация потвърждава състоянието на носителя; Тъй като жените са изложени на повишен риск от развитие на кардиомиопатия, препоръчва се пълна сърдечна оценка поне веднъж на всеки 5 години след 25-30 годишна възраст 1 .
Граници и смущения
Отрицателният резултат за DMD мутация на MLPA теста не изключва диагнозата при хора със сугестивна клинична картина. Като се има предвид, че точковидните мутации участват в 25-30% от случаите на мускулна дистрофия на Дюшен-Бекер, се препоръчва пълно секвениране на гена DMD.
В семейства, при които мутацията на DMD не е известна, отрицателният резултат от теста MLPA за жени с висок риск не изключва статуса на носител. Наличието на положителна фамилна анамнеза изисква последователността на целия ген 1, 3, 4 .