Кръвна група OAB - Синево

Информирамтii общи

При хората са идентифицирани 26 системи от кръвни групи с 228 антигена; система от кръвни групи се състои от един или повече антигени, управлявани от един ген или комплекс от два или повече тясно свързани гена. Идентифицирани са и други антигени, които не са определени за установени системи. Еритроцитните антигени могат да бъдат протеини, гликопротеини или гликолипиди. Повечето се синтезират от еритроцитите, но някои антигени, като тези, принадлежащи към системата на Луис, се адсорбират от плазмата върху мембраната на еритроцитите. Някои антигени са специфични за еритроцитите, докато други се намират в други клетки в тялото. Познаването на кръвните групи е от съществено значение за трансфузионната терапия. По този начин лица, които нямат определени еритроцитни антигени, могат да произвеждат алоантитела, когато са изложени на кръв, съдържаща тези антигени при кръвопреливане или по време на бременност. Антителата, които взаимодействат с еритроцитните антигени, предизвикват незабавни или забавени реакции на хемолитична трансфузия и хемолитична болест на новороденото 4 .

Системата на кръвните групи ABO е най-важната система на кръвните групи, защото: когато антигените не се експресират на повърхността на еритроцитите, съответните антитела винаги присъстват в плазмата, като стимулите за производството на антитела са представени от различни фактори на околната среда, като например бактерии (напр. Е. coli), които експресират на повърхността структури, почти идентични с ABO въглехидратите; образуваните антитела са смес от IgM (предимно) и IgG, активни при 37 ° C и способни да активират комплемента, а високата плътност на антигенните места върху мембраната на еритроцитите позволява свързването на голям брой антитела, водещи в случай на несъвместимо кръвопреливане в системата ABO, при остри хемолитични трансфузионни реакции 2; 4 .

Всички имунокомпетентни индивиди произвеждат естествени антитела (изоагглутинини или изохемолизини) към липсващите антигени на ABO (H) групата. Анти-А и анти-В обикновено се откриват 3-6 месеца след раждането, а на 5-годишна възраст титърът на антителата достига своя максимум и се поддържа през цялата зряла възраст. Титърът на IgM антителата може постепенно да намалява с напреднала възраст. Анти-А и анти-В антитела присъстват и при тези със слаби А или В варианти. Новородените обикновено нямат значително количество анти-А и анти-В в плазмата, с изключение на родените от алоимунизирани майки, при които могат да присъстват IgG антитела от майката, които са преминали през плацентата. ABO антителата не са основна причина за хемолитична болест при новороденото поради инхибиране на антителата от разтворими А и/или В вещества, присъстващи в кръвта, както и А или В антигени, присъстващи в клетки, различни от еритроцитите; също така, афинитетът на свързване на антителата със захарните молекули е по-слаб от този на антителата към протеиновите молекули, като D4 антигена. Хемолизата е по-вероятна, ако майката е група O, а детето е група A 2 .

Препоръки за определяне на кръвна група ABO 2

преди кръвопреливане;
преди инвазивна или хирургична процедура, потенциално свързана с усложнения от кървене, които могат да изискват трансфузия;
предродилно и постнатално имунохематологично наблюдение на майката и детето;
на кръводарители;
за ABO съвместимост при трансплантация на бъбреци и сърце.

Обучение на пациента - не се изисква предварително обучение; полезна е информация за инфузионни лечения с макромолекулни разтвори, извършени преди определянето, трансфузии през последните 120 дни, инфекциозни заболявания с Грам-отрицателни микроби със/без сепсис, злокачествени заболявания (карцином, лимфом, миелом) 3 .

Събран образец - а) капилярна кръв от пулпата на пръста; б) венозна кръв 3 .

Контейнер за прибиране на реколтата - б) вакуутан без добавки или активиращ гел (червена или безцветна капачка); за автоматичен метод: 4 ml вакуунер, съдържащ EDTA (тъмно лилав капак) 3 .

Количество прибрано - б) доколкото вакуумът позволява 3 .

Причини за отхвърляне на доказателствата - силно хемолизиран образец 3 .

Стабилност на пробата - тестът се извършва незабавно, ако това не е възможно, пробата се държи 48 часа при 2-8 ° C; за автоматичния метод кръвната проба има стабилност от 7 дни при 2-8 ° C 3 .

Необходима е обработка след прибиране на реколтата - след пълна коагулация при стайна температура серумът и съсирекът се отстраняват. От останалите червени кръвни клетки се приготвя 10% суспензия в собствена плазма или във физиологичен разтвор 1; 3. За метода на картонена аглутинация се приготвя суспензия от 5% червени кръвни клетки в специална суспензионна среда. За автоматичния метод кръвната проба ще бъде центрофугирана за получаване на плазма и ще бъде вкарана в анализатора (плазмата ще остане над червените кръвни клетки) 3 .

Методи за определяне - Лабораториите на Synevo извършват:

а. директен/глобуларен метод (Beth-Vincent) за определяне на ABO кръвна група, използвайки анти-А, анти-В и анти-АВ серуми, със следните варианти:

- хемаглутинация на плочата 3. Използват се два контрола: контролен AB (червени кръвни клетки на пациента със AB серум) и автоконтрол (червени кръвни клетки и собствен серум) 1 .

- аглутинация и гел-филтрация върху карти с микроепруветки, съдържащи гел, импрегниран с еритроцитния антиген-специфичен реагент, който трябва да бъде определен (миши или човешки моноклонални антитела) - директен ABO групов тест и определяне на Ag RH1 (D) и Ag RH 1,2,3 (DCE).

За метода на аглутинация на карти положителната реакция се потвърждава само ако контролната микротръба е отрицателна. Положителната реакция се изчислява в зависимост от размера на аглутинатите от + до ++++.

Известна група и Rh контролна кръв се използва при всяка проба на пробите 3 .

б. автоматичен метод на хемаглутинация върху плочи с кладенци (в централната лаборатория Synevo)

Работните плотове (Erytype S) съдържат 12 тест ленти с по 8 кладенчета (1 лента = пълен тест ABO и Rh фактор).

Кръвната група ще бъде определена както чрез директния, глобуларен метод (Beth - Vincent), който подчертава еритроцитните антигени, използвайки тестови серуми (сухи моноклонални серуми, които подреждат част от реакционните ямки), така и чрез косвения, плазмен метод (Simonin Vincent). ), което подчертава антителата в плазмата, анализирани с помощта на тестови еритроцити, като аглутинацията се извършва в непрозрачните ямки на работната лента. Кладенецът на лентата включва отрицателен контрол на реакцията.

Реакцията на еритроцитна аглутинация при директния метод се усилва чрез използването на бромелаин (протеолитичен ензим, който разцепва полипептидни вериги на повърхността на червените кръвни клетки, като по този начин намалява отрицателното натоварване на клетките; следователно ще увеличи силата на привличане между червените кръвни клетки в присъствието на подходящото антитяло).

В последния етап всяка ямка от работната лента се оценява и снима автоматично от анализатора, като резултатите се интерпретират по следния начин:

Положителна реакция - наличие на аглутинация (интензивността се изчислява от 1+ - 4+)
Отрицателна реакция - липса на аглутинация
Неубедителна реакция - реакцията +/- ще бъде интерпретирана от лекаря

Всички получени изображения и резултати се проверяват и валидират от лекаря 3 .

Граници и смущения

Резултатът от определянето на кръвната група трябва да бъде прочетен от двама души и евентуално потвърден на втора кръвна проба 1; .

Грешки при четене поради технически грешки:

- мръсни стъклария; бактериално замърсяване;

- наличие на микротагове (фалшива аглутинация);

- не се наблюдава: пропорции на червените кръвни клетки/серум, ред на капване на кръвни тестове (противоречива аглутинация), време за четене - късно четене: сухи ръбове (фалшива аглутинация), ранно четене (липса на аглутинация или лоша аглутинация).

Грешки поради червените кръвни клетки

а) Наличие на ролки (псевдоаглутинация): използване на макромолекулни разтвори (Dextran, HES), нарушения на коагулацията, непълно коагулирани кръвни проби, хиперфибриногенемия, продукти от разграждането на фибрина, фибринолитични агенти, диспротеинемия, парапротеинемия, крезогулин, лекарства (високи дози хепарин, протамин сулфат), ревматоидни фактори, повишен холестерол, билирубин, левкоцитоза, левкоцитни ензими 2. Контролът АВ е положителен; ерадикацията на еритроцитите позволява правилното представяне на глобуларната проба 1 .

Наличието на студени аглутинини (светлината на автомобила е положителна). Кръвната проба и реагентите се инкубират предварително при 37 ° С и тестът се извършва горещо 2 .
Червени кръвни клетки, обхванати от алоантитела: новородено поради несъвместима бременност (в Rh, ABO система), пациент, прелян с несъвместима кръв.
Определяне на кръвна група върху кръв, събрана от пъпната връв: желатинът Wharton, макромолекулно вещество, което заобикаля еритроцитите, придава вид на псевдоаглутинати. За да го премахнете, е необходимо да измиете еритроцитите поне 6 пъти, преди да определите 1 .
Наличие на лекарствени имунни комплекси.

При септицемии с грам-отрицателни бацили криптоантигените (Т) са изложени на ензимното действие на бактериални агенти, разпознати от антитела (анти-Т), присъстващи в повечето човешки серуми 2. Контролът AB е положителен 1 .

Липсващи или слаби аглутинации или двойна поява на популация: аглутинацията не е пълна, с наличие на свободни червени кръвни клетки (аглутинатите се появяват на розов фон) 1; 2:

стара кръв;
слаби антигени: новородени, недоносени;
слаби подгрупи A или B;
затихване на антигена (при левкемии, лимфоми, болест на Ходжкин);
пациент от група А или В, прелян с кръв от група О, кръвоизлив при майката и плода;
наличието на голямо количество вещество А или В в плазмата (рак на стомаха, панкреаса), което неутрализира изследваните антитела (червените кръвни клетки трябва да се измият, за да се отстранят);
наличие на химера или мозайка (изключение, напр. трансплантация на костен мозък).