Количествена PCA в реално време в индустрията; Новини-Медицински
Отказ от отговорност: Тази страница е автоматичен превод на тази страница, първоначално на английски. Моля, обърнете внимание, тъй като преводите се генерират машинно, не всички преводи ще бъдат перфектни. Този уебсайт и неговите уеб страници са предназначени за четене на английски език. Всеки превод на този сайт и неговите уеб страници може да бъде неточен и неточен, изцяло или частично. Този превод е предоставен на практика.
Усилване на специфични ДНК фрагменти
Полимеразната верижна реакция (PCR) е метод, който използва механизма на репликация на ДНК за усилване на определена част от ДНК. Това включва използването на ДНК полимераза, която прави нови ДНК вериги, използвайки свободни нуклеотиди.
Използвайки два къси фрагмента от ДНК, известни като праймери, е възможно да се насочи ДНК полимераза към специфични области на ДНК. При нормална PCR реакция има цикли от реакции, които експоненциално усилват ДНК целта.
Как измервате количеството на ДНК целта ?
PCR (qPCR) в реално време или количествена, флуоресцентна боя се използва за намиране на усилване, както се случва в реално време. При ниски концентрации знакът на флуоресценция не се открива над фона. С увеличаване на нивата се увеличава и флуоресцентният знак. Броят на циклите, необходими на флуоресцентния знак, за да стане откриваем, е известен като "Ct стойност". Стойностите на Ct се изразяват като числа на цикъла, т.е. ако са необходими 15 цикъла, за да може знакът да бъде намерен, тогава стойността на Ct е 15. По-голямо количество ДНК означава, че отнема по-малко време, за да може флуоресцентният знак да се установи над фоновия шум, което от своя страна означава, че са необходими по-малко цикли . Следователно, по-високите концентрации на ДНК имат по-ниска стойност на Ct.
Ако заедно с тестовите проби се използват известни концентрации на ДНК, тогава количеството на ДНК в тестовите проби може да бъде измерено. Това е възможно поради връзката между стойността на Ct и количеството на ДНК целта; разлика с една стойност на Ct (цикъл) съответства на двойна разлика в количеството на ДНК. Следователно, ако известно количество ДНК има Ct стойност 15, а тестовата проба има Ct стойност 14, тогава пробата има двойно количество ДНК.
Различни флуоресцентни багрила
Съществуват различни видове флуоресцентни багрила, които могат да се използват в qPCR; специфични и неспецифични багрила. Неспецифичните багрила, като SYBR зелено, се свързват неспецифично с двуверижна ДНК. Тъй като количеството на PCR продукта се увеличава, това води до повече двуверижна ДНК, за която SYBR зелено да се свърже. Това означава последователно, че има по-интензивен флуоресцентен знак. Проблемът обаче е, че тя може да се свърже с всяка двойно верижна ДНК, като праймери, а не само с целевата част, която се усилва.