Имунология - Bioxa - 11 медицински лаборатории по биология - Reims, Epernay, Tinqueux, Sézanne

Имунология

Противоядрени антитела

Анти-ядрените антитела (ANA) са автоантитела, насочени срещу антигенни детерминанти на ядрото на клетките на тялото, те се откриват по време на неспецифични автоимунни заболявания на органи, наречени коннективит, най-известният от които е Lupus Erythematosus Disseminated (LED).

Те се търсят от Индиректната имунофлуоресценция (IFI) върху култури от човешки Hep-2 клетки, на които можем да различим много аспекти на флуоресценцията спрямо вида на откритото антитяло. По този начин фиността на изображенията, получени при флуоресценция, дава възможност да се опишат много различни антитела, свързани с различни видове патологии (вж. Циркулиращи антикоагуланти).

Откриване на ANA от IFI

Принцип: Серумът на пациента се отлага върху субстрата (най-често клетки Hep-2) и се инкубира във влажна камера за 30 минути, като през това време антителата, присъстващи в серума, ще се свържат с техните антигенни цели и тяхното присъствие ще бъде разкрито. чрез добавяне на анти-човешко имуноглобулиново антитяло, белязано с флуоресцеин. Четенето ще определи 2-те основни параметъра на тази техника: появата на флуоресценция и титъра на антителата.

Интерпретация: Появата на флуоресценция може да бъде хомогенна, петниста, нуклеоларна, цитоплазмена или мембранна в зависимост от разпознатите антигени, като всички смеси между тези различни видове са възможни.

Титърът на антителата се изразява с последното разреждане на серума, което дава видима флуоресценция, при възрастни минималното значимо ниво е 1/80 (1/40 при деца), нивата се измерват до разреждане 1/640, което съответства на много висока скорост, разреждането може да продължи, за да се разграничат два вида флуоресценция, които биха се припокривали на една и съща подложка.

Идентифициране на ANA

В зависимост от появата на наблюдаваната флуоресценция, която повече или по-малко подсказва за определен тип антитела, могат да се използват различни техники за идентифициране на ANA.

1 Анти-ДНК антитела, естествени и/или денатурирани:
Повечето анти-ДНК антитела разпознават и двата типа молекули, като нативната ДНК е двуверижна и денатурирана едноверижна ДНК, търсенето само на анти-ДНК антитела е от малък интерес (много случаи без клинична корелация). В момента има 4 техники на разположение за търсене на тези антитела.

Тест на Farr: След инкубация на серума с радиомаркирана ДНК, имунните комплекси се утаяват и радиоактивността, налична в утайката, е пропорционална на нивото на анти ДНК антитела в пробата. Този тест има голямото предимство, че е количествен (резултат в IU/ml), но техническото му изпълнение е трудно.
IFI за Crithidia luciliae: Това е бичуван протозой, който съдържа кинетопласт, много богат на кръгова естествена ДНК, флуоресцентното изображение позволява лесно четене, кинетопластът, разположен недалеч от основното тяло на флагела, се различава лесно от сърцевината. Полученият резултат е качествен.
Тестове с ELISA: Фрагментите от естествена ДНК, фиксирани в дъното на ямките на микротитърните плаки, свързват антителата на серума на пациента, които след това ще бъдат разкрити от анти-човешко IgG антитяло, маркирано с пероксидаза, например. резултатите са количествени и се изразяват в различни единици в зависимост от използваната техника (най-често IU/ml).
Имунодот: Това е ELISA техника, извършена върху нитроцелулозна лента, към която е прикрепена естествена ДНК. Отчитането дава качествен резултат, който понякога е трудно да се интерпретира при ниски нива на антитела.

2 Антихистонови антитела:
Това е пъстра група антитела, реагиращи с различни хистони или нуклеозоми, те се търсят най-често чрез ELISA, намират се при СЛЕ и в по-голямата част от СЛЕ, индуцирани от лекарства, техният клиничен интерес остава за момента.

3 Антитела към разтворими ядрени антигени (ENA):
Те са насочени срещу извличащи се съставки на ядрото и са отговорни за различните видове петниста флуоресценция. Те имат имена, свързани с първия описан пациент (Sm), или свързаната патология (SS за синдром на Sjögren), или тяхното молекулно тегло (gp100).

Класификация:

Анти-RNP антитела: Те се намират при СЛЕ и смесен коннективит.

Антитела срещу Sm: Те се откриват в 70% от лупуса и практически само при тази патология.

Антитела срещу SS-A: Те се срещат при някои СЛЕ, но особено при синдрома на Gougerot-Sjögren. Те също са свързани с повишен риск от атриовентрикуларен блок при новородени, чиито майки са носители на този тип антитела.