HPLC анализ на оптимизация на метода на витамин С и създаване на референтна стойност - PDF безплатно

От централната лаборатория в университета в Любек на медицинския център на Университета Шлезвиг-Холщайн Ръководител: проф. Д-р мед . Сейфарт и медицинския факултет на университета в Любек Декан: проф. д-р med . Solbach HPLC анализ на витамин С: оптимизация на метода и създаване на референтна стойност Встъпителна дисертация за получаване на докторска степен от Университета в Любек - от медицинския факултет - представена от Корнелия Арлен Фоке от Бремен Любек 2010 1

анализ

1. Докладчик: проф. Д-р мед. ichael Seyfarth 2-ри докладчик: Priv.-Doz. Д-р мед. Gunther Eitz Устен ден за изпит: 09/06/2010 Одобрен за печат. Любек, 6 септември 2010 г., подписан проф. Д-р мед. erner Solbach - декан на Медицинския факултет 2

яжте това, което е измеримо. (Галилео Галилей) 3

2.2.8 Изследвания за стабилността на пробите. 31 2.2.9 Оптимизирани HPLC методи за определяне на аскорбинова киселина в серум и плазма. 32 2.2.10 Изследвания на урина и ликвор витамин С. 32 2.3 Валидиране на метода. 33 2.3.1 Проверки за коректност. 33 2.3.2 Прецизни изследвания. 33 2.3.3 Изследвания на границата на откриване и количествено определяне. 34 2.3.4 Изследвания на линейността на измерването. 34 2.4 прилагане на методи: определяне на референтни стойности и изследвания на кинетиката на витамин С. 34 2.4.1 Референтни стойности. 34 2.4.2 Кинетика. 35 2.5 Статистически методи. 35 3. Резултати. 37 3.1 оптимизиране и валидиране на метода. 37 3.1.1 Стационарна фаза. 37 3.1.2 Фаза на подвижност. 37 3.1.3 Вътрешен стандарт. 40 3.1.4 Коректност. 40 3.1.5 Точност. 41 3.1.6 Граница на откриване. 41 3.1.7 Линейна трапезария. 3.1.8 Стабилност на пробите от витамин С. 3.1.9 Измерване на проби от урина и ликвор. 46 3.2 прилагане на методи. 47 3.2.1 Определяне на референтната стойност. 47 3.2.1.1 Изследване за възрастови разлики. 49 3.2.1.2 Изследване за специфични за пола различия. 51 3.2.2 Кинетика на витамин С. 53 4. Дискусия. 56 4.1 оптимизация на метода. 56 4.2 Ограничения на метода. 58 4.3 Референтни стойности. 58 4.4 Кинетика. 59 4.5 Възможни приложения. 60 4.6 Outlook. 60 5

5. Обобщение. 61 6. Приложение. 62 Библиография. 67 Благодарности. 80 автобиография. 81 Декларация за независимост и декларация за кандидатстване. 82 6

Списък на съкращенията Фиг. Фигура Aqua дестилирана вода d ден ECD електрохимично откриване EDTA Етилендиаминтетраоцетна киселина HPLC високоефективна течна хроматография I.E. международни единици i.v. интравенозно kg kg kg телесно тегло l литър LDL липопротеин с ниска плътност mg illigramm min inute ml илилитър µmol ikromol mmol illimol PA мета-фосфорна киселина на наноампер №. Номер pavk периферна артериална оклузивна болест PCA перхлорна киселина rp HPLC обърната фаза HPLC RT стайна температура s. вижте раздела за стандартно отклонение SD.Таблица U обороти UV ултравиолетови V волта VK коефициент на вариация 7

В допълнение, чрез интерфейс, който позволява системата да бъде контролирана и данните от измерванията да бъдат записани и оценени с помощта на компютър. Фигура 5: Представяне на HPLC система с подвижна фаза (разтворител), помпа, инжекционна система (инжектор), колона (HPLC колона), детектор (детектор), отпадъци (aste) и свързан компютър за оценка на данните (данни) ( http://www.chemistry.nmsu.edu/instrumentation/aters_hplcsystem.gif). Тъй като съединенията се задържат върху твърдата фаза за различни периоди от време (време на задържане), веществата могат да бъдат идентифицирани, т.е. възможен е качествен анализ. В хроматограмата графичното представяне на сигнала на детектора (ос y) спрямо времето (ос x), височината на отклонението, така нареченият пик, също позволява определяне на концентрацията, т.е. количествен анализ, чрез изчисляване на височина или площ. Фиг.6: Пример за хроматограма. Размерът на отклонението (оста y) се нанася срещу времето (оста x) (времето на задържане). А и Б показват два върха с различна височина. 20-ти

Систематично изследване на стабилността на пробите в различни среди Създаване на референтни стойности за различни възрастови групи Изследване на кинетиката на витамин С при здрави доброволци Освен това трябва да се провери дали оптимизираният метод е фундаментално подходящ и за определяне на витамин С в други биологични течности, особено в урината и цереброспинална течност. 26-ти

2. Материал и методи 2.1. 4250 UV-VIS детектор (erck Hitachi) Амперометричен детектор L-3500A (erck Recipe) HPLC колона и защитна колона: Synergi 4 µm Hydro-RP 80A 150 x 4.6 mm (Phenomenex 00F-4375-E0) Комплект патрони за охрана, AQ -C18 Касета 4 x 3,0 mm (Phenomenex AJ0-7511) HPLC софтуер: odel D-7000 Хроматография Софтуер за станция за данни HPLC система anager (erck) Система за филтриране: Вакуумно филтриращо устройство (illipore) Целулозен ацетатен филтър 0,2 µm размер на порите ( Sartorius AG 11107-47-N) Други устройства: ph-eter (ettler Delta 345) Vortex ischer aage (ettler Toledo Ag 241) ултразвукова баня 2.1.2 Серуми, плазми, ликьор и урина Серуми и плазми: За разработване на метода и валидиране бяха Остатъчни серуми и плазми, урини и течности от рутинния анализ на централната лаборатория на U университетска клиника 27