ДНК пръстови отпечатъци - Наръчник на химика 21
Химия и химическа технология
Общоприето е, че спектрофотометрията в инфрачервената област на спектъра е най-добрият метод за идентификация поради уникалността на ясно изразената област на пръстовия отпечатък на спектъра за дадено лекарство. [c.12]
За разделяне на пуринови и пиримидинови основи, нуклеозиди и нуклеотиди в лабораторната практика се използват всички видове хроматография, хроматография на хартия (включително електрофореза върху хартия и пръстови отпечатъци), тънкослойна хроматография [16], всички видове колонна хроматография (адсорбция, разпределение, йонообмен и проникване на гел) ... Смята се, че когато се разделя чрез тънкослойна хроматография, оптималното количество нуклеотиди е 0,2-30 µg чрез хроматография върху хартия 10-200 mgq чрез електрофореза върху хартия 100-500 µg. На колона нуклеотидите могат да бъдат разделени в количества от 50 μg до няколкостотин милиграма. Разбира се, в някои случаи на аналитично или подготвително разделяне тази рамка може да бъде значително разширена. [в.37]
Пептидна карта (пръстов отпечатък). Двуизмерно подреждане на пептиди, характерни за даден протеин, които се образуват при неговата частична хидролиза. [c.1016]
Голям интерес представлява тънкослойната модификация [40] на хартиен пръстов отпечатък съгласно Ingram, която дава възможност да се намали времето за получаване на пептидни карти (отпечатъци от пръсти) с коефициент десет или повече и значително да се намали количеството на анализираното триптичен хидролизат. Също така, за да постигнете това [c.317]
По-бърз метод за отделяне на пептиди от ензимен хидролизат е методът на пептидната карта (пръстов отпечатък или пръстов отпечатък), който комбинира електрофореза под високо напрежение и хартиена хроматография. Използвайки този метод, е възможно да се сравнят пептидни смеси, получени по време на разцепването на различни протеини, и да се разкрият такива малки разлики в аминокиселинния състав на отделни пептиди, като заместването на една аминокиселина с друга. Такива различия са от голямо значение при сравнителното изследване на хомоложни протеини от различни растителни и животински видове, както и при определяне на генетични промени в структурата на протеина в резултат на точкови мутации. [в.81]
Трябва обаче да се отбележи, че фракциите, елуирани от Sephadex, като правило не са хомогенни и съдържат няколко пептида (до 10 или повече). Следователно този метод на разделяне трябва да се комбинира с техники за фракциониране като пръстови отпечатъци и йонообменна хроматография. [c.83]
Подобни отпечатъци от олигонуклеотидни смеси могат да бъдат получени в тънък целулозен слой. Описани са два вида такива разделения: тънкослойна електрофореза от до- [c.55]
По-голямата част от скорошната работа е извършена с радиоактивна РНК, което е позволило да се установи структурата върху много по-малки количества материя. Заедно с методите за пръстови отпечатъци за бързо идентифициране и изясняване на структурата на олигонуклеотидите, този подход изглежда най-обещаващ за бъдещи изследвания в тази област. [в.78]
Отделни петна се елуират и в случаите, когато не се изисква допълнително пречистване, се идентифицират олигонуклеотидите и моларната концентрация се определя от тяхната радиоактивност спрямо общата радиоактивност. Типични пръстови отпечатъци, получени за РНК на сателитния вирус на тютюневия некрозен вирус чрез хидролиза с панкреатични IT-РНКази, са показани на фиг. 11.1 и 11.2. Съвпадението на снимките, получени в различни лаборатории, потвърждава, че за идентифициране на мономери, димери и тримери е достатъчно да се знае тяхното положение върху пръстовия отпечатък. [c.265]
Молекулното тегло и изоелектричната точка са характерни параметри на протеина. Точната идентификация на протеинова молекула обаче се основава на определянето на аминокиселинната последователност. Още на първия етап от този процес, който включва разделянето на протеин на малки фрагменти, може да се получи значителна информация за даден протеин. В момента се предлагат на пазара протеолитични ензими и химически реагенти, които разграждат протеините при специфични аминокиселинни остатъци (Таблици 4-10). По този начин ензимът трипсин разцепва остатъците от лизин и аргинин от страната на карбоксилните групи; химичният реагент цианоген бромид разцепва пептидните връзки, разположени след остатъците на метионин. Тъй като такива специфични ензими и реагенти разцепват ограничен брой връзки в протеинова молекула, при тяхното действие се образува смес от големи пептиди. Чрез разделяне на тази смес чрез електрофореза или хроматография е възможно да се получи пептидна карта, характеризираща изследвания протеин. Тези пептидни карти понякога се наричат протеинови пръстови отпечатъци (Фигура 4-53). [c.219]