Dgp Screen In vitro диагностично приложение; sra CLIA комплекс; s Magas - PDF безплатно изтегляне
Препоръчайте документи
Екран QUANTA Lite ™ h-tTG/DGP
За in vitro диагностична употреба CLIA сложност: Висока
Екранът QUANTA Lite ™ h-tTG/DGP е ензимно свързан имуносорбентен анализ (ELISA) за полуколичествено откриване на IgA и IgG антитела срещу синтетични дезаминирани пептиди, получени от глиадин (DGP) и срещу човешка тъканна трансглутаминаза (htTG) при хора серум. Наличието на тези антитела може да се използва заедно с клинични резултати и други лабораторни тестове за диагностициране на IgA суфикс и IgA дефицит на целиакия (чувствителност към глутен).
Принцип на метода Пречистените синтетични дезамидирани глиадинови пептиди (DGP или глиадин II) се свързват с клетките на полистиреновата микротитърна плоча при условия, които запазват антигена в естествената му форма. Предварително разредени контролни проби и разредени проби от серум на пациента се прилагат към различни клетки, позволявайки на всеки глиадинов пептид и/или h-tTG IgA или IgG антитела да се свържат с имобилизирания антиген. Несвързаната проба се промива и към всяка клетка се добавя белязан с ензим анти-човешки IgG и IgA конюгат. Втора инкубация позволява на белязаните с ензими анти-човешки IgA и IgG да се свържат с всяко антитяло от пробата на пациента, което преди това се е свързало с клетката. След измиване на всички несвързани ензимни кандидати с анти-човешки IgA и IgG, остатъчната ензимна активност се определя чрез добавяне на хромогенен субстрат и измерване на интензивността на получения цвят. Тестът може да бъде оценен спектрофотометрично чрез измерване на интензивността на цвета, образуван в клетките, и сравняването му с контролите. 1
Реактиви 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9.
Предупреждения 1. 2.
Предпазни мерки 1. 2. 3. 4.
може да доведе до неприемливо ниски стойности на абсорбция. Важно е стриктно да се придържате към инструкциите за работа с конюгата HRP, за да предотвратите подобни проблеми. Неправилното почистване на устройства и инструменти може да замърси химически конюгата HRP. Остатъците от често използвани лабораторни химикали като формалин, белина, алкохол или детергенти причиняват разграждане на HRP конюгата с течение на времето. След използване на химически почистващи или дезинфектанти, оборудването и приборите трябва да се изплакват обилно.
Условия за съхранение 1. 2. 3.
Съхранявайте всички кит-реагенти при 2-8 ° C. Не може да се замразява. Реагентите са стабилни в рамките на посочения срок на годност, когато се обработват и съхраняват според указанията. Неизползваните микротитърни епруветки с антигенно покритие трябва да се съхраняват с изсушителя във фолио и да се запечатват при 2-8 ° C. Разреденият буфер за измиване е стабилен за 1 седмица при 2-8 ° C.
Вземане и обработка на проби Тази процедура е подходяща за тестване на серумни проби. Не се препоръчва добавяне на азид или други консерванти към тестваните проби, тъй като те могат да изкривят резултатите от измерванията. Не трябва да се използват проби, съдържащи микробиологично замърсени, термично обработени или видими утайки или твърди частици. Избягвайте използването на високо хемолизирани или липемични проби. След събиране серумът трябва да се отдели от съсирека. “CLSI (NCCLS) Документ H18-A3” препоръчва следните условия за съхранение на проби: 1) Не съхранявайте пробите на стайна температура повече от 8 часа. 2) Ако тестът не може да бъде извършен в рамките на 8 часа, дръжте пробите в хладилник при 2-8 ° C. 3) Ако тестът не може да бъде извършен в рамките на 48 часа или пробите трябва да бъдат транспортирани, замразете и съхранявайте проби при -20 ° C или по-ниско. Замразените проби трябва да се смесят добре след размразяване и преди изпитване
Извършване на теста Материали, налични в комплекта 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1
h-tTG/DGP Screen ELISA микротитърна плоча (12-1 x 8 клетки) с опорна рамка 1,2 ml предварително разредена ELISA отрицателна контрола (ELISA Negative Control) 1,2 ml предварително разредена h-tTG/DGP Screen ELISA умерено положителна контрола (h- tTG/DGP Екран ELISA Ниско положително) 1,2 ml предварително разредено h-tTG/DGP Екран ELISA високо положително (h-tTG/DGP Екран ELISA високо положително) 50 ml HRP проба разредител 25 ml HRP концентрат за измиване), 40-кратна концентрация 10 ml HRP h- tTG/DGP IgG/IgA (HRP h-tTG/DGP IgG/IgA), (коза), анти-човешки IgG и IgA 10 ml TMB Хромоген 10 ml HRP Стоп разтвор 0,344 M сярна киселина
Допълнителни материали, които не са включени в комплекта Микропипети за 5, 100, 200-300 и 500 mérl Измервания Еднократни накрайници за микропипети Епруветки за разреждане на проби от пациент с обем 4 ml дестилирана или деионизирана вода 1 L Съд за HRP Измиване на четец за микротитърни плочи на измерване на OD при 450 nm (или 620 nm за измерване при две дължини на вълната)
Метод Преди да започнете: 1. 2.
Изчакайте пробите и реактивите да достигнат стайна температура (20-26oC) и разбъркайте добре. Разредете HRP промивния концентрат 1:40, като добавите съдържанието на бутилката HRP промивен концентрат към 975 ml дестилирана или дейонизирана вода. Ако цялата плоча не се използва едновременно, може да се разреди по-малко количество: за всеки 16 клетки, които ще се използват, добавете 2,0 ml концентрат към 78 ml дестилирана или дейонизирана вода. Разреденият буфер е стабилен в продължение на 1 седмица, когато се съхранява при 2-8 ° C. Направете разреждане 1: 101 на всяка проба от пациент, както следва: добавете 5 µl проба към 500 µl разредител HRP проба. Разредените проби трябва да се използват в рамките на 8 часа. НЕ РАЗРЯДАЙТЕ h-tTG/DGP екран ELISA умерен положителен контрол, h-tTG/DGP екран ELISA висок положителен контрол и ELISA отрицателен контрол. За да се определи наличието или отсъствието на h-tTG/DGP IgA и/или IgG антитела във всяка от единиците, използвайте две клетки за измерване на всяка от трите контроли и една или две клетки за измерване на всяка проба от пациент. Препоръчително е да се определят дублирани проби от проби на пациента.
Провеждане на теста 1.
Контрол на качеството 1. 2. 3.
Изчисляване на резултатите Първо, определете средната стойност на OD стойностите за всеки репликат. Тогава реактивността на всяка проба може да бъде изчислена чрез разделяне на средната OD на пробата със средната OD на h-tTG/DGP Screen ELISA умерено положителен контрол. Умножете резултата по броя единици на h-tTG/DGP екрана ELISA умерен позитивен контролен етикет.