Clostridium difficile-токсин AB - Synevo
Обща информация и препоръки
Clostridium difficile - спорулиран анаеробен Грам-положителен бацил - е отговорен за производството на псевдомембранозен колит и индуцирана от антибиотици диария.
Въпреки че токсините на C. difficile отдавна са подчертани от изследователите, едва през 1970 г. е потвърдена тяхната роля в развитието на псевдомембранозен колит. .
C. difficile произвежда поне 2 токсина, наречени А и В. Токсин А, ентеротоксин, увеличава секрецията на течности и възпалението в чревната лигавица. Токсин В, който има in vitro цитотоксично действие около 1000 пъти по-силно от токсин А, действа синергично с него. Докато токсин А се произвежда от почти всички щамове на C. difficile, участващи в началото на заболяването, наскоро беше доказано, че някои щамове отделят само токсин В 4. .
Колитът, предизвикан от C.difficile, е резултат от дисбаланс на бактериалната флора на дебелото черво, колонизация с C.difficile и производството на токсини. Лечението с антибиотици е отговорно за промяната на флората и основната цел на инфекцията са хоспитализираните хора. Колонизацията се осъществява по фекално-орален път. C. difficile също образува топлоустойчиви спори, които могат да се запазят в околната среда от няколко месеца до няколко години. Когато замърсяването е преобладаващо, епидемии от диария могат да възникнат в болници и други отделения за грижи. Нормалната чревна флора се противопоставя на колонизацията, но антибиотичното лечение чрез потискане на флората улеснява разпространението на C.difficile 1 .
Първоначално заболяването е описано при пациенти, получаващи лечение с клиндамицин, но понастоящем се смята, че всеки антибиотик може да причини псевдомембранозен колит. В проучвания, обхващащи голям брой пациенти, повече от 70% от случаите са свързани с приложението на цефалоспорини (особено второ и трето поколение) 3. Ампицилин и амоксицилин следват в реда на честотата. По-малко ангажирани са макролидите и други пеницилини. Аминогликозиди, флорохинолони, триметоприм-котримоксазол, имипенем и меропенем могат понякога да причинят заболяването. Дори краткото приложение на антибиотик може да причини колит. Рискът е по-висок в случай на продължително лечение и комбинации от антибиотици 1 .
Възрастните хора и имунокомпрометираните пациенти са най-склонни да развият колит, причинен от C. difficile. Въпреки че малките деца често са носители на щамове Clostridium difficile, които отделят токсини, клинично проявената инфекция в тази възрастова група е необичайна.
Колонизацията с C. difficile генерира широк спектър от клинични състояния, от асимптоматичен статус на носител, лека самоограничаваща се диария до псевдомембранозен колит и фулминантен колит. Най-сериозните усложнения са токсичен мегаколон, перфорация на дебелото черво и перитонит. Повечето пациенти развиват диария по време на или непосредствено след започване на антибиотично лечение. Въпреки това, 25-40% от пациентите не стават симптоматични по-рано от 10 седмици след края на антибиотичната терапия. Някои случаи на спонтанно заболяване са описани и при пациенти без анамнеза за антибиотично лечение; 1; 3; 4 .
Най-често клиничната картина включва:
-лека или умерена диария, рядко кървава;
-колики в корема;
Диагнозата на C. difficile-индуциран колит трябва да се подозира при всеки пациент с диария, който е получавал антибиотично лечение през последните 2 месеца и/или диария е започнала 72 часа (или повече) след хоспитализация.
Откриването на токсини от C. difficile е важно за установяване на подходяща терапия. Ако клиничните прояви не отзвучат при прекратяване на инкриминираното антибиотично лечение, се препоръчва перорално приложение на ванкомицин, метронидазол или бацитрацин.
Не се препоръчва рутинна култура на бактерията поради честото изолиране на нетоксиносекретиращи щамове 3 .
Тестът, извършен в нашата лаборатория, открива токсини А и/или В във фекалиите чрез имунохроматографска техника 2 .
Събран образец - прясно отделени фекалии; препоръчителното количество е 1-2 g образувани изпражнения или 1-2 ml течни изпражнения; проби, събрани на ректален тампон 3, не се приемат .
Контейнер за прибиране на реколтата - еднократен контейнер за изпражнения; добавянето на консерванти е забранено 2 .
Необходима е обработка след прибиране на реколтата - анализът се извършва върху прясно отделените фекалии за максимум 3 часа след прибиране на реколтата (за предпочитане). Ако това е невъзможно, пробата ще се съхранява при 2-8 ° C максимум 3 дни. За преработка определено количество от хомогенизираната проба се обработва със специален разредител за разтваряне на токсини и се центрофугира за отделяне на супернатантата 2. .
Тествайте стабилността - след прибиране на пробата, пробата трябва да бъде транспортирана до лабораторията възможно най-скоро; пробата е стабилна за 3 дни при 2-8 ° 2 .
Метод - имунохроматографски. Количество от разредената проба се смесва с конюгиран разтвор 1 (съдържа специфични моноклонални антитела срещу токсин Clostridium difficile А и токсин В, конюгиран с цветни микрочастици) и с конюгиран разтвор 2 (съдържа биотинилирани антитоксин А и антитоксин В специфични антитела ). Определен обем от тази смес се прехвърля в специален прозорец на тестовата кутия; кутията съдържа стрептавидин, имобилизиран в тестовата лента, и кози анти-имуноглобулинови антитела в контролната лента. Специфичните антитела ще се свържат с антигена в пробата и ще образуват комплекс "антиген-сандвич". Комплексите мигрират през капилярите, достигат до зоната, съдържаща тест лентата, свързват се със стрептавидин, присъстващ в твърдата фаза и могат да се разглеждат като черна цветна лента с всякакъв интензитет в прозореца с резултати. При липса на токсин А и/или В в пробата няма да се вижда лента. Тестът се валидира само ако в контролния прозорец 2 се получи черна лента с каквато и да е интензивност .
Референтни стойности
Clostridium difficile токсин A/B - Отрицателен.
Резултатите се изразяват качествено: положителни/отрицателни 2 .
Граници и смущения
Отрицателният резултат не изключва наличието на състояние, свързано с C. difficile. Фалшиво отрицателен резултат може да има следните причини:
-неправилно събиране, транспортиране или съхранение на пробата;
-ниски нива на A/B токсини, под границата на откриване на метода;
1. Крейг А Грончевски, д-р, д-р Джонатан П. Кац. Clostridium Труден колит. eMedicine Gastroenterology (актуализация от август 2006 г.). Ref Ref: Интернет комуникация.
2. Лаборатория Синево. Специфични препратки към използваната работна технология през 2010 г. Тип на справка: Каталог.