Асоциация на BVD със синдром на psdacine PDD

BVD асоциация със синдром на PDD в Psitaccine

Първо публикувано: 9 май 2016 г.

psdacine

Редакционна група: MEDICHUB MEDIA

Резюме

Провентрикуларна дилатационна болест (PDD) е възпалително заболяване на птиците, което засяга предимно вегетативните нерви на горния и средния храносмилателен тракт, като случаите обикновено представят дисфункция на стомашно-чревния тракт като дисфагия, регургитация и наличие на несмляна храна във фекалиите. Общ брой от 54 пситацинови птици, принадлежащи към различни видове (6 Amazona aestiva, 1 Amazona ventralis, 7 Ara ararauna, 4 Ara macao, 12 Psittacus erithacus, 2 Cacatua galerita, 1 Cacatua alba, 2 Cacatua sulphureus, 1 Pionis menstruus, 2 Pionites leucogaster, 11 Psittacula krameri, 5 Psittacula eupatria) са включени в изследването. Скринингът с PCR методи за наличие на ABV идентифицира 47 заразени животни, които са получили положителни резултати в анализите. Останалите птици са отрицателни при тези анализи. Също така се наблюдава обилно присъствие на ферментационни дрожди в различни органи на заразени папагали.

Обобщение

Разширеното провентрикуларно заболяване (PDD) е възпалително състояние, което засяга птиците в автономните нерви на горния и средния храносмилателен тракт, пациентите обикновено имат дисфункции на стомашно-чревния тракт като дисфагия, регургитация и наличие на несмляна храна във фекалиите. 54 psittacine птици, принадлежащи към различни видове (6 Amazona aestiva, 1 Amazona ventralis, 7 Ara ararauna, 4 Ara macao, 12 Psittacus erithacus, 2 Cacatua galerita, 1 Cacatua alba, 2 Cacatua sulphureus, 1 Pionis menstruus, 2 Pioes leucogaster, 11 Psittacula krameri, 5 Psittacula aupatria) бяха обекти на настоящото изследване. PCR скрининговите методи за определяне на наличието на птичи борнавирус (AVV) идентифицират 47 случая на положителна инфекция. Останалите участници показаха отрицателен резултат. В различните органи на заразените папагали се наблюдава и обилно присъствие на ферментативни дрожди.

Проучванията показват, че има няколко генотипа на вируси, които засягат предимно определени видове папагали и които причиняват различна лезийна картина и еволюция. Към днешна дата изследванията все още не са изяснили честотата на всеки генотип в популациите на папагалите и не са успели да направят ясно разграничение между определен генотип и някои видове папагали. Статистическите изследвания са сравнително трудни за извършване, тъй като е установено, че един и същ генотип може да бъде изолиран от различни видове (особено във ферми с няколко вида папагали, вирусът се предава независимо от генотипа на всеки вид) и в много случаи два или повече генотипа са изолирани от един и същ индивид. В допълнение, лабораторният анализ разкрива присъствието на вируса (в много случаи резултатът се представя като положителен борнавирус) без препратка към генотипа.

Лабораторният анализ се прави или с цел откриване на наличието и идентифицирането на вируса, или с цел откриване на специфични антитела. Понастоящем потвърждаващата диагноза за положителен птичи борнавирус се прави чрез PCR анализ, който разкрива присъствието на вируса в биологични проби, но не удостоверява състоянието на заболяването. Много тествани папагали (от различни видове) бяха открити с положителен борнавирус, но без клинична или лезионна картина. В допълнение, PCR анализът разкрива вируса, без да установява точния генотип на открития вирус. Определянето на антителата и титъра на антителата показва, че имунната система на птицата реагира на вируса, който е влязъл в тялото. Въпреки че се предполага, че високият титър на антителата предполага инфекция и опитът на организма да унищожи вируса, клиничните изследвания показват, че положителните папагали с много висок титър на антителата имат най-висок риск от развитие на PDD (при положителни папагали с антитялото не е диагностицирано с PDD дори след няколко месеца, през което време птицата не е била отрицателна).

Много хора развиват PDD или нервни и храносмилателни симптоми. На този етап диагнозата може да бъде поставена въз основа на кръвни тестове (положителна PCR за птичи борнавирус или специфични антивирусни антитела). Клиничната диагноза на PDD е трудно да се установи въз основа на симптомите, тъй като много симптоми се появяват при много други инфекциозни, паразитни или метаболитни заболявания. Диагнозата PDD се потвърждава въз основа на специфични храносмилателни лезии (особено провентрикуларни лезии), допълнени с хистологични изследвания на проби, събрани от провентрикулуса, пипетата, бъбреците, мозъка и гръбначния мозък.

Проведохме проучване, което включва 54 пситацини от таксономично класифицирани видове от различни родове: 6 Amazona aestiva, Amazona ventralis, 7 Ara ararauna, 4 Ara macao, 12 Psittacus erithacus, 2 Cacatua galerita, Cacatua alba, 2 Cacatua sulphureus, един Pionis менструален цикъл, 2 Pionites leucogaster, 11 Psittacula krameri, 5 Psittacula eupatria. Разпределението по пол е 31 мъже и 23 жени. Възрастта варира от по-малко от 1 година до 17 години, като е неизвестна и е трудна за оценка за 7 птици. От общия брой птици, включени в това проучване, 9 са изпратени за аутопсия, биологични проби след смъртта са събрани, докато 12 други птици са събрани чрез биопсия. Всички птици показват клинични признаци на PDD, като проявите са съсредоточени върху храносмилателния тракт (намалено телесно тегло, диария, несмляна храна в изпражненията или разширен провентрикулус), някои птици също показват симптоми след увреждане на нервната система (тремор, атаксия или конвулсии).

Диагнозата е установена чрез PCR. PCR стандарт, съдържащ прицелна С-последователност на С-последователност, се получава чрез клониране на целевата последователност във вектор, като се използва комплект за клониране с двоен промотор Topo TA, следвайки инструкциите на производителя. Генетичният материал беше извлечен с помощта на комплект за мини-подготовка SNAP, съгласно инструкциите на производителя. Концентрацията на генетичния материал се определя чрез спектрофотометрия, като се използва устройството Gene Quant II RNA/DNA и РНК се използва като шаблон за SDC-C PCR анализ, за ​​да се потвърди наличието на SDC C последователност за C. jejuni. Стандартите са получени от препарати, съдържащи между 1,2 и 1,2 х 108 геномни еквивалента на 3 μl стандартен генетичен материал, които са съхранявани при -20 o C, размразявани и замразявани най-много три пъти преди употреба. PCR праймерите и пробите (CJTP2) са разработени с помощта на софтуера Primer Express за насочване към конкретния регион.

За анализ на генетичния материал, пречистен чрез RT-PCR техника, той беше извлечен с реагент за приготвяне на проби, съгласно инструкциите на производителя. Количество (1 ml) проба, приготвена и включена в разредителя, се центрофугира при 16 000 х g в продължение на 10 минути, за да се утаят биологичните частици, и супернатантата се аспирира внимателно и се отстранява. Пробите се центрофугират още веднъж при 16 000 х g за 1 минута, всички остатъци от супернатанта се отстраняват и остатъкът се суспендира отново в 200 μl реагент за приготвяне на проби чрез силно хомогенизиране. Суспензиите се нагряват чрез плаване на водна баня в продължение на 10 минути; пробите се отстраняват и се оставят да се охладят до стайна температура за 2 минути, след което се центрофугират отново при 16 000 х g за 2 минути. Количество от 50 μl супернатант се добавя към 50 μl разредител за молекулярна биология и разредената проба от генетичен материал се използва като стандарт за RT-PCR анализ...

PDD синдромът и имплицитният ABV са пряко приписани на леталността за 34 случая. Оцеляването е регистрирано, когато клиничните признаци на папагалите избледняват или дори изчезват и те оцеляват поне месец след представянето им в офиса. Скрининг със стандартни методи за случаи на аутопсия установи, че всички са заразени птици и положително маркира извършените тестове, а именно: Ara ararauna, 2 Psittacus erithacus, Cacatua galerita, Amazona ventralis, Amazona aestiva, 4 Psittacula krameri.

Наблюдава се и обилно присъствие на ферментационни микроорганизми в различни органи на папагалите, включени в изследването. От общия брой птици със сложна храносмилателна патология, девет умират скоро след пристигането си в клиниката поради тежки симптоми. Наличните органи на тези животни са взети за микробиологично изследване и PCR анализ. В повечето случаи вирусът е открит в повечето органи на болни птици, включително мозъка, черния дроб, бъбреците, сърцето и белите дробове. Фекалните проби, взети от всички клинични случаи, са положителни само при 24 птици. Хомогенатите от събраните органи и биологични проби са добавени към различни култури от клетки на птици и бозайници. На 7, 10 и 14 дни след заразяването културите бяха инспектирани за характерни промени. Експериментите върху клетъчни култури на птици и бозайници разкриха изненадващо широк спектър от органи и клетъчни типове, в които се развива вирусът, демонстрирайки, че той няма предпочитание към клетките на централната и периферната нервна система.

Ферментационните микроорганизми са изследвани за всички птици с типични клинични признаци на PDD, включени в проучването, за да се сравнят и интерпретират сравнително възможностите, при които клиничната диагноза разкрива PDD, но резултатите от PCR са отрицателни ABV, като е възможно еволюцията на болестта поради развитието на дрожди. или други ферментативни микроорганизми, които могат да причинят подобно заболяване. Получените резултати предполагат, че има колективен инфекциозен фактор на предаване и предаването може да стане по храносмилателен или дихателен път.

  • Птичият борнавирус е потвърден като основен етиологичен агент на PDD при папагалите.
  • Заразените птици, дори ако нямат клинични признаци, представляват резервоар за вирус, осигуряващ периодичното елиминиране на вируса чрез изпражненията.
  • Анализът на биологични проби, събрани от птици, може да открие положителни борнавируси, които могат да развият клинични признаци (включително PDD) или да останат клинично здрави.
  • Инкубационният период е сравнително кратък, от 12-14 дни до 30 дни.
  • Диагнозата PDD позволява установяването на терапевтичен курс, основан главно на противовъзпалителни лекарства (нестероиди), които в повечето случаи осигуряват моментното спиране или забавяне на заболяването.
  • Прогнозата винаги е неблагоприятна.