Ваксина срещу пилешка салмонелоза и метод за предотвратяване на пилешка салмонелоза
Употреба: ветеринарни биотехнологии, средства за специфична профилактика на салмонелоза при пилета, ваксина срещу салмонелоза при пилета, метод за предотвратяване на салмонелоза при пилета. Изобретената ваксина срещу салмонелоза на пилета съдържа суспензия от щама Sal. enteritidis VGNKI N204 и стабилизатор на желатин-захароза в ефективно количество. Атенюиран Sal. enteritidis VGNKI N204 е получен чрез въвеждане в оригиналния устойчив на рифампин щам Sal. enteritidis N204 плазмиди с последваща селекция на инсерционни мутанти. Използването на нова ваксина срещу пилешка салмонелоза, базирана на културата на атенюирания щам Sal. enteridis VGNKI N204, във ветеринарната практика може да увеличи безопасността на домашните птици до 90%. 2 с.п. f-кристали, 1 таб.
Изобретението се отнася до ветеринарната биотехнология, по-специално до средствата за специфична профилактика на салмонелоза при пилета.
Сал. enteritidis, адаптиран към тялото на пилетата, причинява значителна смъртност на пилета (до 10-12%) и носители на салмонела при възрастни пилета. Продуктите за клане на птици, заразени със салмонела, са един от основните източници на причинителя на токсикоинфекцията със салмонела при хората.
Широкото разпространение на Sal.enteritidis сред пилетата, значителни материални щети, причинени на птицевъдството, опасност за хората, липсата на ефективни лекарствени продукти, налагат намирането на средства за специфична профилактика на тази салмонелоза при пилетата.
Известна ваксина срещу пилешки пулорозен тиф, съдържаща клетъчна суспензия от щама Sal.gallinarum - pullorum N 9 и стабилизатор (Gordon et al., 1959). Ваксината се прилага на ограничен брой кокошки. Ваксината се прилага подкожно на възрастна птица, за да се получи трансовариален имунитет при пилета. Щам 9R няма генетични маркери за диференциация от епизоотични щамове и, както всеки щам в R форма, има по-ниска антигенна структура поради загубата на странични вериги в полизахаридните молекули на клетъчната стена. Освен това ваксината от щама 9R причинява патологични промени в яйчниците, характерни за пулорозата, при ваксинирани птици, което прави тази ваксина неподходяща за практическо широко приложение.
Целта на изобретението е ваксина срещу салмонелоза на пилета, която е безвредна, с висока антигенна и имуногенна активност.
Тази цел се постига чрез получаване на ваксина, съдържаща клетъчна суспензия на щама Sal. enteritidis 204, захароза, желатин и дестилирана вода при следното съотношение компоненти w/v%: Суспензия на клетки от щама Sal.enteritidis 204 с концентрация 175-250 милиарда.
микробни клетки в 1 cm 3 42,0-55,0 Захароза 5,0-7,5 Желатин 1,5-2,0 Дестилирана вода Останалото Методът за предотвратяване на салмонелоза при пилета включва въвеждането на ваксина в тялото на пилета на 2-3 дни с вода, съдържаща клетъчна суспензия на щама Sal.enteritidis 204 с концентрация 175-250 милиарда/cm 3 микробни клетки в количество 42,0-55,0 cm 3 и захароза-желатинов стабилизатор в количество 45-48 cm 3 в размер на 0,5 -1, 0 милиарда/cm 3 микробни клетки на пиле, два пъти с интервал от 2 дни след 1-24 часа на гладно.
Щамът Sal.enteritidis 204, използван за производството на ваксината, се получава чрез целенасочена селекция от епизоотичния щам Sal.enteritidis 126. Щамът е депозиран в колекцията от бактериални култури на Всесоюзния държавен научен контролен институт по ветеринарни лекарства под номер 204.
П р и м е р 1. Получете устойчив на рифампицин мутант (Rif r) вирулентен щам Sal.enteritidis 126, засявайки суспензия от бактерии (1 милиард/cm 3) върху MPA, съдържаща 100 μg/cm 3 рифампицин. Rif r-мутант запазва оригиналната вирулентност за мишки (LD50 = 36 микробни клетки).
Плазмидът P VD 3: Tn7 се въвежда чрез конюгиране в Rif r-мутанта, който не може да се репликира в клетки Sal.enteritidis при температура 43 ° C. Трансконюганти Sal.enteritidis 126 Rif r (P VD 3: Tn7) се отглеждат на MPA със стрептомицин (20 μg/cm 3) при температура 43 о С, селектирани мутанти Sal.enteritidis 126 Rif r: Tn7.
В експерименти с бели мишки се идентифицират клонинги на мутанти, при заразяване с които (интраперитонеално, доза 5x10 4 микробни клетки) 100% от животните биха оцелели.