Трансплантация на ембриони, цели и задачи
Трансплантацията на ембриони се разбира като прехвърляне на ембриони от гениталиите на животни донори към гениталиите на животни реципиенти. В този случай в тялото настъпва нормална бременност с развитието на ембриони, а след това и на плода.
Трансплантацията на ембриони от говежди говеда в млечни крави има неоспоримо предимство пред чифтосването на говежди бикове с такива крави и следователно ще увеличи производството на говеждо месо. Възможно е да се получат близнаци чрез трансплантация на един ембрион във всеки маточен рог или чрез въвеждане на допълнителен ембрион в небременния маточен рог. Можете да получите разплодно ценно потомство от крави от местни породи, които са имунизирани срещу различни заболявания.
Трансплантацията на ембриони също може да се използва за изучаване на много въпроси от физиологията и патологията на бременността, междувидова хибридизация. Например след трансплантация на кози ембриони на овце се раждат нормални ярета, а агнета се раждат от кози след трансплантация на овчи ембриони.
Важен момент при трансплантацията на ембриони е подборът на донори. Донорът е животно с висока стойност, от което се получават няколко ембриона след хормонална индукция на полиомиелит и осеменяване със спермата на доказан производител на подобрители. Избират се само онези животни, които са способни на многократна овулация и дават за дълъг период на употреба голям брой ембриони, подходящи за трансплантация. Като донори е по-добре да се използват здрави крави на възраст от 4 до 5 години с добре развита млечна жлеза, подходяща за машинно доене и които не са имали усложнения при раждането и следродилния период. Първият етап на възбуда на половия цикъл след раждането трябва да бъде синхронен и завършен, с изразени явления: еструс, сексуална възбуда и топлина.
Операцията по прехвърляне на ембриони е икономически изгодна само когато забележителни разплодни животни се вземат като донори. В някои случаи, за да се получат ембриони, се препоръчва да се използват разплодни ценни крави в последните етапи от продуктивния им живот, за да се получат повече потомци от тях.
Оплождането на яйцеклетките се извършва в яйцепровода. Получените зиготи се подлагат на смачкване и повечето от тях при говеда влизат в матката на 4-ия ден. Препоръчително е да се извличат ембриони от крави на 7-8-ия ден, а от овце - на 5-6-ия ден след първото осеменяване (преди ембрионът да бъде освободен от прозрачната обвивка). За извличане на ембрионите се използват два метода: нехирургичен и хирургичен.
С нехирургичен метод за извличане на ембриони животните се фиксират в машина. Ректумът се освобождава от съдържанието му и се извършва задълбочен ректален преглед. Определете колко жълти тела има във всеки яйчник. Опашката е фиксирана с панделка. Провеждане на тоалетна и дезинфекция на външните гениталии и перинеума. За спиране на перисталтиката на ректума се инжектират епидурално 10 ml 2% разтвор на новокаин. За измиване на ембрионите от матката се използват различни инструменти.
Ориз. 1 Катетър за фетална екстракция:
1 - тяло на катетъра; 2 - дорник; 3 - тръба за впръскване на въздух; 4 - кутия за въздух
Ориз. 2 Нехирургична екстракция на ембриони:
1 - катетър за фетална екстракция; 2 - шийка на матката и 3 - маточен рог; 4 - надуваем балон; 5 - яйчници
След фиксиране на катетъра, маточният рог се измива със спринцовка Luer с капацитет 50-60 ml. В маточния рог, в зависимост от неговия размер, той се инжектира на порции от 40 до 60 ml измиваща течност, изразходвайки не повече от 500 ml за измиване на всеки рог. Пълненето на матката с промивна среда и степента на нейното изтичане се контролират ректално.
Фосфатно буфериран физиологичен разтвор (PBS) се използва като среда за изплакване.
Разтворът се приготвя в тридистилирана вода. Първите 4 вещества се разтварят в 800 ml, а 5-то и 6-то - всяко поотделно в 100 ml. В резултат се получават три разтвора, които се автоклавират и след това се смесват. В тази форма те могат да се съхраняват при 4 ° C до 2 седмици. Непосредствено преди употреба в FBS се въвеждат следните компоненти (на 1 литър):
говежди серумен албумин - 4 g:
глюкоза - 1 g (5,56 mmol);
Na-пируват - 0,036 g (0,33 mmol);
пеницилин (калиева сол) - 100 хиляди единици.
Събраната в цилиндъра промивна течност се защитава в продължение на 20-35 минути при температура 20-37 ° C, така че ембрионите да потънат на дъното, след което горният слой се отстранява с помощта на сифон. Долният слой течност на порции от 20 - 30 ml за откриване на ембриони се изследва в големи часовници или чаши на Петри под бинокуларна лупа при увеличение 10-50 пъти. Намерените ембриони се прехвърлят с помощта на пастьорска пипета в среда за краткотрайно съхранение (среда на Dulbecco с добавка на 20% фетален телешки серум). След оценка на ембрионите, те се култивират при 37 ° C до трансплантация или се оставят за съхранение.
Хирургично, ембрионите се отстраняват с обща или локална анестезия. Коремната стена се изрязва по бялата линия или по-често в областта на гладната ямка отдясно или отляво, маточният рог се издърпва до повърхността на раната, прави се разрез близо до основата и специален катетър се вмъква. След това чрез игла, вкарана в кухината на рога на нейния връх, или чрез канюла, вкарана в яйцепровода, се въвежда специална среда, която заедно с ембрионите се събира чрез катетър. С този метод се получават до 70% от жизнеспособните ембриони. При заек, свине, овце, крави и кобили ембрионите могат да бъдат отстранени директно от яйцепровода (в рамките на първите 4 дни след осеменяването). Хирургичният метод обаче според много експерти има само научно значение. Това е трудоемко, скъпо и следователно в момента се използва само при дребни животни: овце, кози и др.). След операцията нивото на производство на мляко при животното значително намалява, съществува риск от загуба на донор с висока стойност с обща анестезия. Не може да се повтаря често, тъй като срастванията се образуват в следоперативния период, което затруднява извличането на ембрионите и тогава могат да се развият необратими промени, водещи до безплодие на донорите.