Разработване на перорални и външни формулировки, съдържащи Silybum marianum, in vitro и

S KoA. a, R-COOH + ATP + CoA RC

съдържащи

ДИСЕРТАЦИЯ НА УНИВЕРСИТЕТСКИ ДОКТОР (доктор) Разработване, in vitro и in vivo изследване на орални и външни лекарствени форми, съдържащи Silybum marianum д-р Siposné д-р Fehér Pálma Ръководител: д-р Miklós Vecsernyés УНИВЕРСИТЕТ НА ДЕБРЕТЕН 2017 ЛЕКАР ПО ФАРМАЦЕВТИЧНИ НАУКИ

7. Библиография. 94 7.1. Литература, използвана за подготовка на дисертацията. 94 7.2. Проверен списък с публикации, върху които се базира дисертацията. 113 7.3. Списък на фигурите. 117 7.4. Списък на таблици. 120 8/A Ключови думи. 121 8/B Ключови думи. 121 9. Благодарности. 122 Приложение 10. 123 10.1. Помощ. 123 10.2. Доклади, върху които се базира дисертацията. 124 5

Съкращения AAPS Американска асоциация на фармацевтичните учени ALT аланин аминотрансфераза AST аспартат аминотрансфераза BCS Биофармацевтична класификационна система BHT Бутилиран хидрокситолуен CAT каталаза CCl4 Въглерод тетрахлорид CLS Клетъчни линии DLS Динамично разсейване на светлина DMEM Dulbecco с модифицирана Eagle s среда DMSO ECam диметилов диметил диметил диметилат диметилат диметилов диметилат диметилат диметилат диметилат диметилат диметилат диметилат диметилат диметилат диметилат диметилат диметилат диметилат диметилат диметил киселина Говежди серум FDA Администрация по храните и лекарствата GC/MS Газова хроматография -Масова спектроскопия GPx Глутатион пероксидаза GR Глутатион редуктаза GSH глутатион GSSG Глутатион дисулфид HaCaT Температура L2a Човешка кожа за възрастни Кератиноцити, нисък Ca Balance HO Heme оксигеназа HPLC-течност MS-висока течност MS-MS течност MS-MS -тандемна масспектроскопия IL Интерлевкин IPM Изопропил миристат MDA Малондалдехид MTT 3- (4,5-диметилтиазол-2-ил) -2,5-дифенилтетразолиев бромид NADH Никотинамид аденин динук леотид 6

NADPH Никотинамид аденин динуклеотид фосфат NF-κB Ядрен фактор каппа-лек верижен усилвател на активирани В клетки NMF Естествен овлажняващ фактор Nrf2 Ядрен фактор еритоиден 2-свързан фактор 2 PBS Фосфатно буфериран физиологичен разтвор PS 750 Захароза палмитале ROS Реактивен реактивен кислород Видовете SD Емулгираща система за доставяне на лекарства SLN Солидни липидни наночастици SMEDDS Само микро-емулгираща система за доставка на лекарства SOD Супероксид дисмутаза SP 50 Захароза стеари 50% моноестери SP 70 Захароза стеарат 70% моноестери TBA Тиобарбитурова киселина TC Транскутол TNFα Туморен фактор Фармакология на тумора Фармакология на некрозата Тумор Фармакология на тумора Фармакология на туморите Фармакология на тумора 7

Фигура 2. Контур на експерименталната работа 11

2. Преглед на литературата 2.1. Silybum marianum Silybum marianum е най-често използваната билка за профилактика и лечение на чернодробни заболявания (Фигура 3) (Pepping 1999, Shaker et al. 2010). Жълтият кантарион се използва успешно в народната медицина от векове. Растението принадлежи към племето затворени култури, а семейството на гнездящи съцветия (Asteraceae), произхожда от Югозападна Азия, е растение, отглеждано в Унгария (Vargas-Mendoza et al. 2014). Фигура 3. Silybum marianum/източник: http://evgyogynovenye.hu/2013_mariatovis/ 2.2. Химичен състав на семена от Silybum marianum Кафявият плод от жълт кантарион (Silybi mariani fructus) се използва в медицината. Официално е и в унгарската фармакопея като Silybi mariani extractum siccum rafinatum et normum. Препаратът е пречистен, стандартизиран екстракт от плодовете, съдържанието му на силимарин е 30-65%, той е суровина на много лекарства, лекарствени продукти и хранителни добавки в Унгария (Ph. Hg.VIII.). Добивът е приблизително. Дълъг е 6 мм и съдържа най-голямо количество мазно масло (15-30%) и протеини (20-30%). От фармацевтична гледна точка обаче сместа от съединения в плодовете, която заедно се нарича силимарин, е химически флавонолигнанов комплекс. Основната активна съставка в ядрото е 12

концентрираният силимарин съдържа най-голямо количество (около 50%) силибин (псевдоним силибинин), но също така значителни количества силикристин, силидианин и изосилибинин (фиг. 4). По време на екстракцията могат да се отделят две фази - твърд прах и течна мазна част от днешното семе на трън, което е зрелият плод на растението. Компонентът на силимаринов прах, използван в нашите експерименти, е описан от Kuki et al. (Kuki et al. 2012), характеризираща се с масова спектрометрия (HPLC-MS/MS), комбинирана с високоефективна течна хроматография. В допълнение към основните биоактивни флавоноидни компоненти като силицистин А и В, силидианин, силибин А и В, изосилибин А и В, бяха открити и частично разделени три допълнителни компонента; вероятно два силибинови стереоизомери и един изосилибинов стереоизомер (Kuki et al. 2012). 13

Фигура 4. Химична структура на основните компоненти на силимарин (Kuki et al. 2012) Силимариновото масло е страничен продукт от екстракцията на семена от бял трън. Маслото съдържа незаменими мастни киселини, фосфолипиди, стерини и относително големи количества витамин Е (Hadolin et al. 2001). Следните компоненти на мастните киселини бяха определени от силимариново масло чрез газова хроматография: линолова киселина (39%), олеинова киселина (36,7%), палмитинова киселина (10,1%), стеаринова киселина (6,8%), линоленова киселина (3,6%), арахидна киселина (2,9%) и бехенова киселина (0,57%) (Fathi-Achachlouei et al. 2016). 14.

има лоша разтворимост във вода (0,04 mg/ml). Неговата разтворимост в други разтворители е както следва: транскутол (350,1 mg/ml), етанол (225,2 mg/ml), полисорбат 20 (131,3 mg/ml), глицерил моноолеат (33,2 mg/ml) (Javed et al. 2011). Силимаринът е класифициран съгласно системата за класификация на биофармацевтиците в приложение IV. клас (лоша разтворимост, лоша пропускливост), ниска бионаличност, която често инхибира употребата, въпреки че показва благоприятни терапевтични възможности. През последните години редица изследвания се фокусираха върху увеличаване на бионаличността на силимарин, промяна на разтворимостта, пропускливостта, метаболизма и екскрецията на флавоноидния комплекс. причини за ниска бионаличност на силимарин висока фаза II метаболизъм лоша пропускливост в тънките чревни епителни клетки лоша разтворимост във вода Фигура 5. Причини за ниска бионаличност на силимарин (Javed et al. 2011) 17