Процесът на разследване
Процесът на изследване, от вземане на кръвна проба до електронно изпратени резултати до лекаря, обикновено отнема 5 дни.
Скоростта на процедурата се основава на гладкото завършване на всяка стъпка.
1. Вземане на кръв
Периферна кръв се взема от бременна жена в обем от 10 ml от медицинска сестра. Това също така намалява възможността за замърсяване на пробата с мъжка ДНК, което може да повлияе на определянето на пола на плода (в случай че се поиска тази възможност). Вземането на проби може да се извърши още на 11-та седмица от бременността * и не се изисква на гладно.
Тестът TRISOMY се препоръчва между 11 и 22 седмици от бременността. По-късната респ. последният срок зависи от предпочитанията на бременната жена и препоръката на нейния лекар, предвид нейното медицинско състояние.
Кръвната проба се съхранява в 10 ml EDTA епруветка, която трябва да бъде маркирана с баркод стикер (част от специален формуляр за кандидатстване) и името и личния номер на пациента. След пълнене тръбата за вземане на проби трябва да се завърти много внимателно, но внимателно (обърната и обърната 10 пъти - не се разклаща). Биологичният материал трябва да се съхранява при 4 ° C. Пробата не може да бъде замразена.
Системата за вземане на проби от ДНК BCT на Streck Cell се изисква за предполагаемо удължаване на времето за транспортиране на пробата до лабораторията, което би надвишило 36 часа след вземането на пробите.
2. Доставка на пробата до лабораторията
Пробата, заедно с изцяло и правилно попълнения специален формуляр за кандидатстване, поставен в отделна транспортна торба и термо чанта (при 4 ° C), трябва да бъдат доставени до Medirex a.s., Братислава, в рамките на 36 часа след вземането на пробата. до Централната лаборатория на компанията.
3. В лабораторията: анализ и оценка на специални софтуерни данни
1. Обработка на кръв
След вземане на кръвна проба в лаборатория първо се отделя плазмата, която съдържа генетичния материал на плода в извънклетъчна форма.
2. Изолация на ДНК
Свободно циркулиращата ДНК се възстановява чрез многостепенно прецизно усъвършенстване. ДНК идва както от майката, така и от плода. В случай, че кръвта не взема проби според указанията, кръвните клетки могат да се разпаднат и по този начин да намалят съотношението на феталната ДНК, което прави невъзможно откриването на възможни фетални тризомии. Качеството на пробата се проверява в лабораторията, за да се изключи разпадането на клетките. Ако това явление бъде открито в пробата, ние предупреждаваме клиента, че е необходимо ново вземане на проби.
3. Подгответе ДНК за анализ
Изолираната ДНК изисква специална лабораторна обработка - т.нар изготвяне на последователна библиотека. За анализ е необходима последователна библиотека, използваща технологията, използвана за секвениране от следващо поколение. По време на подготвителния период на библиотеката се използва полимеразна верижна реакция, за да се усили пробата, тъй като количеството ДНК, получено от плазмата, е много ниско. Отнема 48 часа за създаване на библиотека, подходяща за машинен анализ.
4. Проба за контрол на качеството
Тестът TRISOMY отнема време и пари, а резултатът зависи от точно подготвена проба. Цената на това дали е подготвена подходяща последователна библиотека в лабораторията е потвърдена чрез чувствителен флуоресцентен електрофоретичен анализ. Успешно генерираните последователни библиотеки се препращат към следващата фаза, която е последователен анализ.
5. Краен анализ - секвениране
В специална лаборатория, като отчитаме 30 милиона фрагмента за 20 часа, извършваме анализ на цял геном с ниско покритие (не четене на всяка една основа, статистически само всеки десети). Резултатът от това секвениране е само прибл. 500 MB данни, оценени от специален софтуер с помощта на уникален математически алгоритъм. Компютърната оценка на данните, получени от проба с помощта на високопроизводителен сървър, отнема приблизително. Продължава 20 минути.