PDF QUANTA Lite TM F-Actin IgA ELISA Само за ин витро диагностика CLIA сложност висока - безплатна

Кратко описание

Изтеглете QUANTA Lite TM F-Actin IgA ELISA за ин витро диагностика CLIA Сложност: Висока.

elisa

Описание

QUANTA LiteTM F-Actin IgA ELISA

Само за „In-vitro диагностика“ CLIA сложност: висока

Употреба по предназначение QUANTA Lite ™ F-Actin IgA е ензимно-свързан имуносорбентен анализ (ELISA) за полуколичествено откриване на IgA антитела срещу F-актин на гладки мускули в човешки серум. При пациенти с клинични находки, предполагащи целиакия, наличието на IgA клас антитела срещу F-актин се използва за подпомагане при оценка на вероятността от значителна атрофия на вили.

Принцип на теста F-актинов антиген, пречистен чрез афинитетна хроматография, беше свързан с ямките на полистиреновата микротитърна плоча, като същевременно се запази оригиналната конфигурация. Предварително разредените контроли и разредените серуми на пациента се пипетират в различни ямки. Съществуващите F-актинови антитела се свързват с антигена. Остатъкът от пробата/контрола се отстранява чрез измиване. Ензимно-белязан анти-човешки IgA се пипетира в ямките и се свързва с антителата на пациента по време на втора инкубация. След отстраняване на останалия конюгат в следващ етап на измиване се добавя хромогенен субстрат. Интензивността на получената цветна реакция се измерва след спиране с фотометъра на микротитърната плоча. Количествената оценка се извършва чрез сравняване на стойностите на изчезване на пациентите със стойността на калибратор.

Съдържание на тестовата опаковка 1. 2. 3. 4. 5. 6.

Микротитърна ELISA плака, покрита с високо пречистен F-актинов антиген (12-1 х 8 гнезда), с държач за ленти във фолио и сушител ELISA отрицателен контрол, 1 бутилка буфер със стабилизатор и човешки серум без човешки антитела срещу F-актин, предварително разреден готов за употреба, 2 ml F-Actin IgA ELISA нисък положителен (калибратор), 1 бутилка буфер със стабилизатор и човешки серум с антитела срещу F-Actin, предварително разреден готов за употреба, 1,2 ml F-Actin IgA ELISA високо положителен (положителен контрол), 1 бутилка буфер със стабилизатор и човешки серум с антитела срещу F-актин, предварително разреден готов за употреба, 1,2 ml HRP разредител за проби, 1 бутилка - оцветена в розово с Tris-буфериран физиологичен разтвор, Tween 20, протеинови стабилизатори и консерванти, 50 ml HRP измиващ концентрат, 1 бутилка с 40x концентрат Оцветено в червено с буфериран физиологичен разтвор и Tween 20, 25 ml. За разреждане, моля, вижте съответната глава в инструкциите. 1

HRP IgA конюгат, (коза), античовешки IgA, 1 бутилка - оцветена в жълто с буфер, протеинови стабилизатори и консерванти, 10 ml TMB Chromogen, 1 бутилка със стабилизатори, 10 ml HRP стоп разтвор, 0,344 М сярна киселина, 1 бутилка - безцветна, 10 мл

Предпазни мерки 1. 2. 3. 4.

Съхранявайте всички кит-реагенти при 2-8 ° C. Не замразявайте. Реагентите са стабилни до края на срока на употреба, ако се съхраняват и обработват според указанията. Върнете неизползваните ленти за микроелементи в оригиналната опаковка, запечатайте ги херметически и ги върнете в хладилника. Разреденият буфер за измиване е стабилен за една седмица при 2-8 ° C.

Проби Тестът трябва да се извърши със серумни проби. Добавянето на азиди или други стабилизатори към серумните проби може да повлияе неблагоприятно на резултатите. Не трябва да се използват проби, които са микробактериално замърсени, хемолитични, липемични или инактивирани от топлина. След вземането на кръвта серумът трябва да се отдели от кръвта. NCCLS документ H18-A3 препоръчва следните условия за съхранение на проби от пациенти: 1) Не съхранявайте проби при стайна температура повече от 8 часа. 2) Ако тестът не може да бъде извършен в рамките на 8 часа, съхранявайте пробите на хладно място при 2-8 ° C. 3) Ако тестът не може да бъде извършен в рамките на 48 часа, пробата трябва да бъде замразена при -20 ° C или по-ниска. Замразените проби трябва да се разклатят добре след размразяване и преди тестване

Процедура за изпитване Материал, присъстващ в тестовия комплект 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1

F-Actin ELISA микротитърна плоча (12-1 x 8 гнезда), с държач за ленти 1,2 ml предварително разреден ELISA отрицателен контрол 1,2 ml предварително разреден F-Actin IgA ELISA нисък положителен контрол 1,2 ml предварително разреден F-актин IgA ELISA висок положителен контрол 50 ml HRP разредител за проби 25 ml HRP концентрат за промиване, 40-кратен концентрат 10 ml HRP IgA конюгат (от коза), анти-човешки IgA 10 ml TMB Хромоген 10 ml HRP стоп разтвор, 0,344 М сярна киселина

Необходим допълнителен материал Пипети за 5, 100, 200-300 и 500 µL накрайници за пипета за еднократна употреба Реакционни флакони на Eppendorf за серумно разреждане, 4 ml обем дестилирана или дейонизирана вода 1 L флакон за разреден концентрат за измиване на HRP Четец за микротитърни плаки с филтър 450 nm (и 620 nm за двуцветно измерване)

Метод за подготовка на теста 1. 2.

Всички реактиви и проби се довеждат до стайна температура (20-26oC) и се разбъркват добре. Заменете цялото съдържание (25 mL) от промиващия концентрат с 975 mL дестилирана вода. смес (разреждане 1:40). Разреденият буферен разтвор е стабилен за една седмица при 2-8 ° С. Ако цялата микротитърна плоча не трябва да се използва наведнъж, 2 ml концентрат с 78 ml дестилирана вода могат да се добавят, за да се получат 16 ямки. смесете се. Разредете серумни проби 1: 101 чрез смесване на 5 µL серум с 500 µL готов за употреба разредител за проби. Разредените проби трябва да бъдат тествани в рамките на 8 часа. Не разреждайте F-Actin IgA ELISA с нисък положителен контрол, F-Actin IgA ELISA с висок положителен контрол и ELISA отрицателен контрол. Всеки тест изисква две ямки за всяка от трите контроли и една или две ямки за пробата на пациента (препоръчително е всички проби да бъдат подготвени в два екземпляра, докато се постигне необходимата точност и възпроизводимост).

F-Actin IgA ELISA с нисък положителен контрол, F-Actin IgA ELISA с висок положителен контрол и ELISA отрицателен контрол трябва да се извършват заедно с всяко изпитване, за да се гарантира, че всички реагенти и тестовият набор работят правилно. Тъй като F-Actin IgA ELISA с ниска положителна контрола, F-Actin IgA ELISA с висока положителна контрола и ELISA отрицателна контрола са предварително разредени, стъпката на разреждане на пробата от пациента не е необходима за контролите. Допълнителен контрол за осигуряване на качеството може да се извърши в съответствие с националните или 3-ти насоки

международни регулаторни или акредитационни органи. Подходящи контроли могат да бъдат получени от човешки серум и тествани при 25

Отрицателен Съмнителен Положителен 1. 2. 3.

Положителният резултат на анти-F-актин IgA при пациенти с целиакия показва повишена вероятност от тежка атрофия на вили. Отрицателният резултат показва липсата на F-актин IgA антитела или концентрации под границата на откриване на тестовата система. Предлагаме да добавите следната бележка към лабораторните резултати: „Следните резултати бяха получени с INOVA QUANTA LiteTM F-Actin IgA ELISA. Стойностите на F-актин IgA, които са определени с помощта на тестови системи от други производители, не могат да бъдат разменени. Нивото на намерения IgA титър не може да бъде свързано с титър на крайна точка. "

Ограничения на процедурата 1. 2. 3. 4.

Имунните комплекси или други имуноглобулинови агрегати в серума на пациента могат да причинят неспецифично свързване и фалшиво положителни резултати. Не всички пациенти с целиакия са положителни за антитела срещу F-актин IgA. Не всички SMA положителни проби имат F-актин IgA антитела. Откриването на F-актин-IgA антитела при пациенти с чернодробно заболяване трябва да се тълкува с повишено внимание, тъй като наличието на F-актин-IgG антитела в тази болестна група често се свързва с F-актин-IgA антитела, които може да не са свързани с чревната патология. F-актиновите IgA антитела трябва да се измерват само при пациенти с целиакия като помощ при оценка на увреждането на червата. Резултатите от този тест трябва да се използват заедно с клинични резултати и други серологични тестове. Експлоатационните характеристики за проби, различни от серум, не са определени. 4-ти

Данни за ефективността Очаквани стойности Нормален обхват Панел от 500 проби от привидно здрави лица (250 мъже и 250 жени) беше тестван с комплект QUANTA Lite ™ F-Actin IgA ELISA. Възрастта е между 18 и 80 години (средната стойност = 41). Специфичността на анализа е 92,2% (461/500). Установено е, че 3 от 39 проби са положителни за антитела срещу tTG-IgA, така че те могат да бъдат недиагностицирани пациенти с целиакия. Една от тези три проби също е положителна за ендомизий и почти сигурно е случай на целиакия. Разпространението на цьолиакия сред нормалното население на САЩ се оценява на 1 на 133; Следователно доказателствата за недиагностицирани пациенти с целиакия в нормалната кохорта не са неочаквани

Клинична чувствителност и специфичност, тъй като тестът QUANTA Lite ™ F-Actin IgA е предназначен да се използва за оценка на вероятността от увреждане на червата при пациенти с цьолиакия, чувствителността и специфичността са определени въз основа на 445 проби с резултати от биопсия. От 445 проби 157 са имали патология тип 3 и 288 тип 0, 1 или 2 според Marsh.27 N = 445 Marsh not F-актин IgA единици M3a/b/c M0, M1, M2 общо количество Pos (> 24, 9 единици) 76 14 90 Neg (24,9 единици) 60 30 90 Neg (