Основи на съвременната имунодиагностика, Medis CoM
LLC "Medis Com", лекар-консултант O.I. Вострикова, 2003
Традиционните методи на клинични и имунологични изследвания се разделят на методи за оценка на клетъчния и хуморалния имунитет.
В съвременната практика на клинични и имунологични изследвания основният обект на анализ е кръвта - както нейните клетъчни компоненти, така и серумът. В момента, заедно с мононуклеарната фракция, гранулоцитната фракция е все по-често в полето на вниманието на имунолозите.
Днес имунолозите са почти напълно изоставили методите, основани на образуването на розетки. Това бяха първите методи, които направиха възможно откриването на човешки Т и В лимфоцити в момент, когато необходимите антитела не бяха на разположение за откриване на тези клетки. Броят на недостатъците на тези методи е доста голям: неяснотата на интерпретацията на резултатите (те зависят от условията на реакцията, качеството на реагентите, се определят от състоянието не само на маркери молекули, но и на цитоскелета и др.), трудности, свързани с тяхната стандартизация и автоматизация. Проблемът с определянето на субпопулациите беше решен след въвеждането на поточна цитометрия и появата на широк спектър от моноклонални антитела към маркерни молекули на имуноцитите.
Цитофлуорометричният анализ може да бъде представен както следва:
Клетките се третират с моноклонални антитела към техните мембранни антигени, конюгирани с флуорохроми. В случай на едновременно изследване на няколко маркери антигени, се използва етикетиране с флуорохроми, контрастиращи по цвят. Клетките, третирани с маркирани антитела, пресичат лазерния лъч и генерират различни сигнали (от разсейване напред и отстрани и от луминисценцията на различни флуорохроми), които се записват и анализират от устройството. Резултатите от компютърния анализ се изразяват под формата на едно- и двупараметрични хистограми, отразяващи разпределението на клетките според интензивността на луминесценцията на един или два флуорохрома. Резултатите се изразяват като процент на белязаните клетки и средна интензивност на луминисценция. В случай на използване на два флуорохрома, вземете предвид процента на клетките, маркирани с всеки тип флуорохром и двете багрила едновременно.
Оценка на нарушения на естествения имунитет
При лабораторна оценка на нарушенията на естествения имунитет като правило се определя фагоцитната активност или генерирането на метаболитно активни радикали и се оценява състоянието на комплементната система.
Въпреки че определянето на параметрите на фагоцитозата (фагоцитен индекс и фагоцитно число) с помощта на микроскопично преброяване на фагоцитни клетки и фагоцитирани обекти е методологично правилно, има модификации на метода, които позволяват стандартизиране и автоматизиране на регистрацията на резултатите от него. Например, фагоцитоза на латексни частици, маркирани с флуорохром, което дава възможност да се запишат резултатите от цитофлуорометричните.
Широко разпространен метод за оценка на активността на фагоцитните клетки за намаляване на нитросиния тетразолий. Резултатите от определянето позволяват да се оцени генерирането на формазан чрез появата на синьо оцветяване. Подобен резултат се получава чрез луминесцентни методи за регистриране на образуването на метаболитно активни форми на кислород и свободни радикали чрез записване на хемилуминесценция, усилена от луминофори (луминол и луцигенин).