Определяне на способността за производство на ауксини за откриване на фитохормони с помощта на HPLC

Способността на бактериите да произвеждат ауксини, изследвана с помощта на партидни култури.

Съставът на хранителната среда за култивиране на избраните щамове микроорганизми:

Екстракт от мая - 50 mg/l;

Като предшественик в биосинтеза на ауксини, 250 mg/L L-триптофан се добавя към хранителната среда.

За засяване се използва 3-дневна култура, чиято доза за засяване е 10 6 клетки на 5 ml среда. Бактериите се култивират в епруветки до стационарна фаза на растеж при 28 0 С, в продължение на 5 дни на тъмно.

В края на култивирането суспензиите се центрофугират и филтрират през мембранни филтри с диаметър на порите 0,22 μm.

За да се идентифицират щамовете с най-интензивна способност да произвеждат основния фитохормон от типа ауксин, който определя фитостимулацията - индолил-3-оцетна киселина (IAA) - е извършен сравнителен анализ на фотоелектричен колориметър.

За анализа беше използван реагентът на Салковски, който дава характерно розово-червено оцветяване с IAA. Най-интензивното оцветяване съответства на най-интензивното производство на IAA.

Състав за приготвяне на реагента на Салковски:

Реакцията се провежда в съотношение супернатант: реагент на Салковски - 1: 2, обемът на реакционната смес - 1,5 ml.

Контролът за сравнителния анализ беше хранителна среда без въвеждане на микроорганизми с добавяне на същото количество реактив на Салковски. Показанията бяха взети при дължина на вълната λ = 540 nm. Експериментът е проведен в два екземпляра.

В края на експеримента бяха избрани 5 щама микроорганизми с най-активно производство на IAA.