Определяне на общите имуноглобулини

0,11 130 0,45 500 1,20 1340

и) Радиален имунодифузионен метод

Методът се основава на метода на Манчини, който се основава на измерване на диаметъра на утаяващия пръстен, образуван по време на въвеждането на­в кладенците, нарязани в слоя агар, в които моноспецифичният антисерум е предварително диспергиран. Диаметърът на утаяващия пръстен е право пропорционален на концентрацията на изследвания имуноглобулин. Съдържанието на имуноглобулини се определя спрямо стандартен серум с известна концентрация на имуноглобулини.

Подготовка за анализ:

Приготвяне на агар с моноспецифичен антисерум към имуноглобулини от класове A, G, M.

3% агар "Difco" или агароза върху 0,1 М веронал-мединал бу­ферум с рН 8,6 се смесва нагрят до температура 56 ° C в съотношение­nii 1: 1 с моноспецифичен антисерум, в който концентрацията­концентрацията на антитела е два пъти по-голяма от работния титър (посочен на етикета). Разрежданията на антисерума се правят в 0,1 М веронал-мединал бу­ferre с pH 8,6 Агар, смесен с моноспецифичен антисерум­coy, разпределете равномерно върху стъклени чинии веднъж­мярка 9х12см. За целта поставете месингова или пластмасова U-образна рамка с дебелина 1 мм върху плочата,отгоре се поставя втора стъклена плоча, навлажнена с хидрофобна течност, и пространството между плочите се излива със смес от агар и антисерум в количество от 9 ml.

Приготвяне на суроватка:

Пробата от мляко се центрофугира за 15 минути при 2000 об/мин, поставя се във фризера на хладилника за 80-30 минути, за да се втвърди мазнината. Мастният слой се отстранява с помощта на шпатула и центрофугата се нагрява до 37 ° С. След това на капки добавете 10% разтвор на оцетна киселина, докато­регулиране на рН до 4.6 за утаяване на казеин. Казеин, утаен от центрофуги­загряване и суроватката се филтрира през хартиен филтър.

В слой агар с моноспецифичен антисерум, два отвора с диаметър 2 mm се изрязват рамо до рамо с перфоратор на разстояние 15 mm един от друг. В ямките на първия ред се добавят 2 µl стандартен неразреден и разреден 1: 2, 1: 4, 1: 8, 1: 16 моноспецифичен серум с помощта на микро спринцовка. Ямките на следващите редове се пълнят с тестов млечен серум в обем 2 μl. Плаките се инкубират във влажна камера за 24 h при температура 4 ° C, а плочите с антисерум - до имуноглобулин M-48 h.

След края на инкубацията се измерва диаметърът на утаечните пръстени­ция. Според разреждането на стандартните серуми, калибърът­Референтни криви, изразяващи връзката между концентрацията на имуноглобулини и диаметъра на утаяващите пръстени. За да направите това, половината­нанесени на милиметрова хартия върху оста на абсцисата са диаметрите на утаяващите пръстени на стандартния серум, а по оста на ординатите е известното количество имуноглобулини (IU/ml или mg/ml), съдържащи се в стандартния серум на всяко разреждане. Соеви точки­тире в права линия. За всеки клас имуноглобулини се начертава отделна графика.

Да се ​​определи нивото на имуноглобулини в тестваното мляко­серум върху оста на абсцисата се начертава диаметърът на утайния пръстен­след това възстановете перпендикуляра на пресечната точка с кривата и пресечната точка се проектира върху оста на ординатите. Получената стойност съответства на концентрацията на имуноглобулин от всеки клас­ca, изразено в IU/ml или mg/ml.