МОЛЕКУЛАРНО-ГЕНЕТИЧНИ МЕТОДИ ЗА ДИАГНОСТИКА НА ЧОВЕШКИ ЧОВЕШКИ НАСЛЕДНИ БОЛЕСТИ
Най-адекватните методи, осигуряващи точна диагностика на моногенни заболявания, се основават на изследването на ДНК в областта на определени гени. Въпреки факта, че молекулярно-генетичните методи по правило са много сложни, трудоемки и скъпи, данните, получени в процеса на ДНК диагностика, са много по-точни и информативни от данните на други анализи. Известно е, че ДНК остава непроменена през целия живот на организма и е еднаква във всички ядрени клетки, което прави възможно използването за анализ на почти всички клетки на организма, получени на различни етапи на онтогенезата. Освен това, с помощта на ДНК анализ, увреденият ген може да бъде открит не само при наличие на подробна клинична картина на заболяването, но и преди появата на симптомите, както и при здрави хетерозиготни носители на мутацията в ген.
Обект на ДНК диагностика може да бъде както изследването на ген с цел идентифициране на мутации (директен подход на ДНК диагностиката), така и анализ на сегрегацията на заболяване в определено семейство с полиморфни ДНК области (маркери локуси), тясно свързани с увреден ген (индиректен подход на ДНК диагностика). Пряката и непряка ДНК диагностика се основава на методи, които ви позволяват да идентифицирате малък, но строго определен фрагмент от човешка ДНК. Обикновено за това се използва blot хибридизация или амплификация, последвано от анализ на получените ДНК проби с помощта на електрофореза в агарозни или полиакриламидни гелове или радиоавтография (Глава 18).
Директните методи на ДНК диагностика се използват в случаите, когато генът, отговорен за появата на наследствено заболяване, и основните видове негови патологични мутации са известни. Целта е използването на директни методи на ДНК диагностикаподходящ за такива заболявания като муковисцидоза (основна мутация delF508), фенилкетонурия (R408W), хорея на Хънтингтън (разширяване на CTG повторения) и редица другигих.
Основното предимство на директния метод е висока, почти 100%, точнадиагностика и няма нужда от ДНК анализ на всички членове на ядреното семейство. Откриването на мутация в съответния ген дава възможност за абсолютно точно потвърждаване на диагнозата на наследствено заболяване и определяне на генотипа на всички членове на обременено семейство. Друго предимство на директната диагноза е способността дафеноменът на хетерозиготен пренос на патологични мутации при родители починапациента и неговите роднини, което е особено важно при автозомно-рецесивни заболявания.
Основният недостатък на директните методи е, че те изискватизисква се познаване на точната локализация на патологичния ген в генома, неговата екзон-интронна структура и спектъра на неговите мутации. Понастоящем такава информация не е налична за всички моногенни човешки заболявания.
Недостатъците на директните методи трябва да включват и тяхната непълна информативностност, което е свързано с наличието на широк спектър от патологични мутации в един и същ ген, причиняващи развитието на наследствено заболяване. В зависимост отв зависимост от обема на спектъра на мутациите в даден ген, това информационно съдържание може да варира значително. Някои семейства в този случай остават неинформативни за di-
Таблица 19.6. Информативна стойност на директните методи на ДНК диагностика за различни заболявания
агностици. Раздел. 19.6 дава представа за информативността на директните методи за различни заболявания.
Косвени методи на ДНК диагностика се използват, ако генът е повреденгенезис, при който води до заболяване, не се идентифицира, а само локализира върху специфична хромозома или когато директните методи за диагностика на ДНК не дават резултат (например със значителна дължина и сложна молекулярна организация на гена, както и широк спектър от патологични мутации в него). КосДНК диагностичните методи се основават на анализа на сегрегацията в семейството на алели на полиморфни маркери, разположени в същата хромозомна област или тясно свързани с локуса на заболяването. Полиморфни маркери, използвани за плиткивенозна ДНК диагностика, са точкови замествания, делеции/инсерции,