Методи за оценка на хематологичните характеристики - Физиология - Техники - Каталог на статиите - Физиология
Вземане на кръв.
При извършване на хематологични анализи се взема кръв от рибата веднага след улова, в противен случай общата картина на показателите ще се промени.
Кръв се взема от вената на опашката или аортната крушка, от съдовете на хрилете. Съществува определена последователност на вземане на кръв за различни видове анализи. На първо място, кръвта се взима в пипета Sali, за да се определи съдържанието на хемоглобин, след това в смесители за преброяване на еритроцити и левкоцити, след това в подготовката на Панченков за определяне на скоростта на утаяване на еритроцитите, в капиляра на хематокрита, се прави последното намазване.
При работа с ценни (есетра) или редки риби вземането на кръв се извършва по жизненоважен начин. В такава ситуация се използва пипета на Пастьор, с която се събира кръв от хемалния канал на опашното стъбло веднъж за всички манипулации наведнъж. Това е артериална кръв с малко примес на венозна.
За пълен клиничен анализ се използват индивиди с най-малко 1,5 - 2 g; при риби с по-ниска маса може да се направи само намазка, за да се определи левкоцитната формула и морфологичните характеристики на еритроцитите. Освен това, за да се получат надеждни резултати, трябва да се направят поне 10 паралелни определяния във всяка от изследваните групи.
Определяне на кръвни клетки в оцветена цитонамазка .
За да се изследва структурата на клетките, се преброят незрелите еритроцити (за да се оцени интензивността на еритропоезата) и се определи левкоцитната формула, се взема кръвна цитонамазка.
Техника на подготовка на цитонамазка.
Капка кръв се нанася върху чисто измито и обезмаслено стъклено стъкло, отстъпвайки на 1,5-2 см от ръба му, като се използва специално смляно стъкло, поставяйки го под ъгъл 45 °, с леко и бързо движение, разтегнете капката на слайда, докато се изчерпи напълно.
Правилно направената намазка е тънка, прозрачна, жълтеникава на цвят. Намазката се изсушава на въздух. На изсушената мазка се присвоява номер, посочва се датата. Данните са щамповани на слайд. Записът според номера се прави в полевия дневник.
Фиксиране на цитонамазката .
Сухата мазка се обработва с фиксиращи течности, които правят формованите елементи устойчиви на водата, съдържаща се в багрилата. За фиксиране те използват метилов алкохол, 96 за етилов алкохол или смес от него с равно количество етер (намазката се потапя във фиксатора за 20-30 минути).
Фиксиращата течност се използва за неопределено време. След фиксирането, намазката се поставя в изправено положение върху филтърна хартия в специален съд за сушене, след което се боядисва.
Оцветяване с намазка.
Оцветяването се извършва по метода на Романовски със стандартния разтвор на Giemsa, който се състои в селективно усвояване на три багрила: лазурно, метиленово синьо и еозин. Azur има амфотерна основна реакция, еозинът е кисел, а метиленовото синьо е алкално (Glagoleva, 1981).
Боята Giemsa се състои от 3 g лазур II (смес от равни части лазур I t метиленово синьо), 0,8 g водоразтворим жълт еозин, 250 ml метилов алкохол, 250 ml глицерин.
Оцветяването се извършва върху чаша на Петри. Тампоните се поставят върху две успоредни стъклени пръчки, свързани в краищата с гумени тръби и поставени по краищата на контейнера.
Боята се излива с пипета на дебел слой върху намазката и се оставя за 20-30 минути. След това се излива и препаратът се измива за 10 минути. под течаща чешмяна вода, след което чашите се поставят вертикално върху филтърна хартия. За съхранение готовите намазки се поставят в специален съд (намазка за намазване) с повърхността вътре, така че прахът да не се утаява върху него. Почистването с филтърна хартия не се препоръчва - хартиените влакна ще останат върху намазката и могат да бъдат механично повредени.
Отпечатъци на хемопоетични органи.
За изследване на хемопоетични органи, които позволяват да се прецени нивото на хемопоезата, се подготвят отпечатъци на далака, черния дроб и главата на бъбреците. Техниката на тъканните отпечатъци има редица предимства пред хистологичните парафинови секции: първо, тези отпечатъци отразяват без изкривяване състоянието на фината структура на клетките на хемопоетичната тъкан; второ, няма метод на компресия в метода на тъканните отпечатъци. Последното дава възможност да се сравнят клетките на кръвоносното съдово легло и клетките, присъстващи в хемопоетичните органи на всички етапи на еритропоезата. За да се получат отпечатъци, орган се хваща с пинсета и се отрязва на разстояние 5-6 мм от краищата на пинсетите. След това изрязаната повърхност се извършва върху стъклен предмет. Препоръчително е отпечатъците да се нанасят върху стъклото, така че следите от черния дроб, бъбреците и далака на една и съща риба да са върху един и същ препарат (трябва да се има предвид, че преди всички тези манипулации се освобождава възможно най-много кръв от органа, което се постига в процеса на вземане на кръв за анализ на хематологични параметри от опашния съд). Маркирането, фиксирането, оцветяването, изсушаването на отпечатъци се извършва по същия начин, както при работа с кръвни мазки.