Метод за диагностика на невросифилис
Изобретението се отнася до медицината, а именно до неврологията и дерматологията. Определете количеството сфингомиелин в цереброспиналната течност на пациентите, използвайки поточна тънкослойна хроматография. Неусложненият сифилис се диагностицира с нива на сфингомиелин, вариращи от 3,0 до 3,7 mg%. С ниво на сфингомиелин в количество от 8,7 до 11,1 mg% - невросифилис. Този метод има качествено нов подход и висока ефективност.
Изобретението се отнася до медицината, а именно до неврологията и дерматовенерологията.
Невросифилисът е общото наименование на различни клинични форми на лезии на нервната система със сифилитична етиология, характеризиращи се с тенденция към прогресиране при липса на адекватно лечение. Терминът "невросифилис" включва широк спектър от лезии на централната нервна система, които постепенно се трансформират една в друга с напредването на заболяването. Промени в нервната система се наблюдават при 25-90% от пациентите със сифилис. Диагностиката на невросифилис често е трудна задача, установяването на правилната диагноза е възможно само в 30-70% от случаите. Това се дължи на факта, че идентифицирането на неврологични симптоми и синдроми, характерни за невросифилиса, понастоящем се усложнява от факта, че структурата на сифилитичните лезии на нервната система се е променила спрямо разпространението на изтрити и латентни форми с незначително изразени или липсващи неврологични симптоми . От друга страна, откриването на някои неврологични разстройства при пациенти със сифилис не може да послужи като основа за диагностициране на невросифилис, тъй като тези разстройства често са резултат от различни заболявания и поражения на нервната система с несифилитичен характер. Следователно основната роля в диагностиката на невросифилис играе лабораторното изследване на кръвен серум и цереброспинална течност. Изследването на кръвен серум на пациенти (серологично изследване) се извършва с използване на нетрепонемални (реакция на Вассерман, микрореакции на утаяване с кардиолипинов антиген) и по-чувствителни и специфични трепонемни тестове (реакция на имунофлуоресценция - RIF, реакция на трепонемна имобилизация - RIT). Въпреки това, когато се диагностицира невросифилис, трябва да се има предвид, че серологичните реакции към сифилис могат да бъдат фалшиво положителни при наличието на много други заболявания с несифилитичен характер. По този начин при пациенти с ХИВ инфекция/СПИН могат да се наблюдават фалшиво положителни нетрепонемни и трепонемни тестове и при изследване на кръвен серум при 10% от възрастните хора се открива фалшиво положителна реакция на Васерман. Следователно основният потвърждаващ метод за диагностициране на невросифилис в момента е лабораторно изследване на цереброспиналната течност на пациенти, използващо нетрепонемни и трепонемни тестове.
Въпреки това, ензимно-свързаният имуносорбентен метод за диагностика на алкохол е технически труден, скъп и следователно достъпен за малко лаборатории. За прилагане на този метод са необходими специални системи за изпитване, повечето от които не са адаптирани към изследването на цереброспиналната течност.
Авторите предлагат собствен метод за диагностициране на невросифилис чрез изследване на съдържанието на сфингомиелин в цереброспиналната течност на пациенти с помощта на тънкослойна поточна хроматография върху слоеве силикагел в системата хлороформ-метанол-амоняк.
Методът се провежда, както следва. Цереброспиналната течност на пациенти в количество от 0,4 ml се смесва с хлороформ-метанол в съотношение 1: 2, филтрира се в епруветки, филтърната утайка се измива три пъти със смес от "хлороформ-метанол" (2: 1) съдържащ 0,5 об.% НС1. Към филтрата се добавят 2-3 ml 0,02% разтвор на калциев хлорид, докато се образуват две фази: хлороформ и вода-метанол, след това се разклаща за 1-2 минути и се добавят 2 ml хлороформ. След ясно отделяне горната фаза се изсмуква, останалите в нея липиди се екстрахират с 2 ml хлороформ, екстрактът се измива със смес хлороформ-метанол-0,02% калциев хлорид (3:48:47), изпарява се до сухота в поток от азот и разтворена в 20-25 μl смес хлороформ-метанол (2: 1). Нанесеният чрез утаяване слой адсорбент се изсушава на въздух, активира се за 15 минути във фурна при температура 120 ° С и се разделя на 12-15 ленти, всяка с ширина 4-5 mm. При тези условия разпределението на аналита става само по разтворителя, с изключение на възможността за надлъжна сорбция. Изпитваният липиден материал в количество от 10-14 μg се нанася върху плоча, поставена в плоска стъклена камера за поточна хроматография. Времето за хроматография на фосфолипидите в системата хлороформ-метанол-амоняк (13: 7: 1) е 60 минути. В резултат на хроматографията, изследваната фракция на сфингомиелин е ясно отделена от съседните фосфатидилсерин и фосфатидилхолин. След хроматография плаката се развива върху разтвор на хромова смес при 200 ° C в продължение на 30 минути, след което тя е денситометрична (сканиращ денситометър CS-9000 "Shimadzu"). Според данните за денситометрията се изгражда калибрационна крива, използвайки стандартен препарат на фосфатидилинозитоли от Sigma (САЩ), който се прилага върху отделни ленти от силикагел, така че концентрацията на липиден фосфор да е 1, 2, 3, 4, 5 6, 7, 8 μg, съответно. Идентифицирането на фосфолипидните фракции се извършва с помощта на стандартни цветни тестове на Sigma в концентрационния диапазон от 0,2 до 8,0 μg. В този случай е възможно при стандартни условия да се анализират на всяка плоча едновременно до 15 проби.