Матрични металопротеинази и техните инхибитори в хода на експерименталната хронична болест

Матрични металопротеинази и техните инхибитори в хода на експерименталния хроничен панкреатит.

хода

Матрични металопротеинази и техните инхибитори в хода на експерименталния хроничен панкреатит. урна: nbn: de: gbv: 28-dys2010-0068-5

5 Тези 48 6 Списък на съкращенията 51 7 Литература 52 8 Признание 66 9 Декларация за независимост 67 3

Фигура 1: Клетъчни функции под въздействието на протеолитично активни MMP. (А) Деградация на ЕСМ и миграция на клетки. (Б) индукция на пролиферация или апоптоза. (C) Модулация на медиатори и техните рецептори. (D) Активиране на допълнителни протеази чрез разцепване на техните ензими или техния инхибитор (Vu and Werb, 2000). 3 Матричните металопротеинази са група от над 20 известни цинк-зависими протеази. Те са способни да разграждат основните компоненти на извънклетъчния матрикс, като колаген, ламинин, фибронектин или еластин. Поради своята структура от различни домейни, ММР могат да бъдат разделени на четири групи: матрилизин, ММР с хемопексиноподобни домейни, ММР с трансмембранни домейни, ММР с фибронектиноподобни домейни. Всички ММР имат регион, необходим за секреция, са в латентно състояние и имат каталитичен регион, който съдържа активното място на свързване на цинк. 53 Класификацията на MMP обаче се основава на разделяне на семейства, които обобщават субстратите на MMP (табл. 1). 52 13

Това се отнася и за про-ензимите. Припокриването на специфичността се обяснява с 50% хомология на последователността на TIMP-1 и TIMP-2. 58,61 Получената ММР активност зависи от съотношението на ММР и TIMP в тъканта. Промените в това равновесие водят или до значително повишена активност на протеолизата на MMPs 59, или до повишена фиброгенеза. 60 Име TIMP-1 TIMP-2 TIMP-3 TIMP-4 Функция инхибира Pro-MMP-9 и други активни MMPs Инхибира Pro-MMP-2 и активен MMP-2 Не е определено Не е определено Таблица 2: Инхибитори на тъкани на матрични металопротеинази ( TIMPs) и техните функции Фигура 2: Каскада на активиране на матрични металопротеинази от катепсин и плазмин. Автоматично активиране на Pro MMPs от активни MMP и MT MMP 1. Инхибиране на разбиването на матрицата от TIMP. (Evans et al. 1999) 61 15

Дължина на ампликон TIMP 2: 453 bp TIMP 2 антисенс CAA CAG GCG TTT TGC AAT GCA GA дължина: 23 bp CCC ATT GAT GCT CTT CTC TGT GA дължина 23 bp вектори pqr2 и pqr3 от Graham M.A. Уелс, Neures Limited, Великобритания. 2.1.3 Буфери и разтвори Comassie Blue разтвор DBTC разтвор DEPC-H 2 O 1 част ледена оцетна киселина (50 ml) 3 части изопропанол (150 ml) 6 части H2O (300 ml) Добавете 0,25 g Comassie Blue към 100 ml (1,25 g). DBTC се разтваря с 96% етанол на две части. След това се смесва с три части глицерол. Инкубирайте 1 L dh 2 O с 1% DEPC за една нощ. След това деактивирайте DEPC чрез автоклавиране. Еозин 2,5 g Еозин (Цветен индекс № 45380) 500 ml H 2 O HBSS + FCS Mayers Хематоксилин PBS (фосфатен буфер физиологичен разтвор) Полиакриламиден буфер за електрофореза 50 ml HBSS и 15 ml FCS 4%, поставете върху лед. Следното се разтваря в 750 ml вода: 50 g алуминиев сулфат (KAl (SO 4) 2 12H 2 O) 1 g хематоксилин (цветен индекс № 75290) 0,1 g натриев йодит (NaIO 3) 1,0 g лимонена киселина 50 g хлорохидрат Ad H 2 O до 1000 ml 120 mM NaCl 170 mm NaH 2 PO 4 3 mm KCl 26 mm KH 2 PO 4, ph 7.2 3.03g (0.025M) Tris 14.1g (0.152M) глицин 1.0g (0.1%) SDS на 1000ml с H2O запълнени. Буфер P1, Qiagen 50mM Tris ph 8.0 10mM EDTA Rnase A (400μg/ml) Буфер P2, Qiagen 200mM NaOH 1% SDS буфер P3, Qiagen 2.55M KAc ph 4.8 Буфер QBT, Qiagen 750mM NaCl 50mM MOPS 15% 19 етанол ph 7%

Буфер QC, Qiagen Buffer QF, Qiagen Stop Solution Буфер за субстрат TAE буфер 1L 1M NaCl 50mM MOPS 15% етанол Ph 7,0 1,25M NaCl 50mM MOPS 15% етанол ph 8,2 25mg Orange G 2,5g Ficoll 400 EDTA 0,5M 50mmol/l Tris ph8 + 5 mmol/l CaCl2 242 g Tris 57 ml оцетна киселина 96% 100 ml EDTA 0,5M ph8 до 1000 ml H 2 O двойно разст. Трис буфер Tris-HCl 1 M в DEPC-H 2 O, pH 7,4 Triton разтвор 2,5% 10 ml Triton + 490 ml H2O 2.1.4 Бактериална хранителна среда Щам Escherichia coli DH5 от Gibco BRL (Eggenstein, Германия) е използван като бактериален щам . Културни среди за бактериален растеж са получени от Difco Laboratories, Детройт, САЩ. Ampicillin LB agar plate Добавете 100 mg/l ампицилин към LB agar plate. LB плочи от агар Luria Bertani (LB) - среден 5g екстракт от дрожди 10g триптичен пептон 10g NaCl aqua dest. 15 g агар H 2 O преразпределете до 1 l 5 g екстракт от мая 10 g триптичен пептон 10 g NaCl aqua dest. Регулирайте до рН 7.4 H 2 O, преработете с 1 N NaOH. до 1 l трансформационен буфер 10% (тегл./об.) Полиетилен гликол 1500 30mM MgCl 2 в LB-среден 2.1.5 комплекта Qiagen Miniprep Qiagen Maxiprep QIAquick Spin RNeasy Mini Kit Qiagen, Hilden, Германия Qiagen, Hilden, Германия Qiagen, Hilden, Германия Qiagen, Хилден, Германия 20