Лекарствени продукти, произведени от растителни екстракти като липазни инхибитори - SCHREZENMEIER JUERGEN
1. Използване на следните вещества, екстракти от вещества или есенции на вещества като отделни компоненти или като смес за производството на перорално прилагано лекарство, което действа като инхибитор на липазата:
Кардамон и/или
Риган и/или
Мащерка и/или
Чили (Capsicum frutescens) и/или
Вечерна иглика и/или
Листа от риган (oreganum vugare) и/или
Листа от лайка (Chamomilla recutica) и/или
Индийско орехче (Myristica fragrans) и/или
Ябълково пюре (кюспе) и/или
Зърнен зародиш и/или
Бадем и/или
Лешник и/или
Орех и/или
Тиквено семе и/или
Cuphea wrightii и/или
Вечерна иглика и/или
Маслен лен (Linum usitatissimum) и/или
страхотен репей (Arctium lappa L) и/или
Лен и/или
Зародиши от Helianthus annuus (слънчоглед) и/или
Невен (Calendula officinalis) и/или
Echinops banaticus и/или
Mallotus philippinensis и/или
Рапица и/или
Сусам и/или
черен ким и/или
Cynoglossum officinale и/или
Лапахотея и/или
Arctostaphylos uva-ursi и/или
Каменно цвете (Flor de piedra) и/или
Прополис и/или
Primula Veris и/или
Magnolia officinalis и/или
Целина (Apium graveolens)
2. Използване на следните вещества, екстракти от вещества или есенции на вещества като отделни компоненти или смеси
Кардамон и/или
Риган и/или
Мащерка и/или
Чили (Capsicum frutescens) и/или
Вечерна иглика и/или
Листа от риган (oreganum vugare) и/или
Листа от лайка (Chamomilla recutica) и/или
Индийско орехче (Myristica fragrans) и/или
Ябълково пюре (кюспе) и/или
Зърнен зародиш и/или
Бадем и/или
Лешник и/или
Орех и/или
Тиквено семе и/или
Cuphea wrightii и/или
Вечерна иглика и/или
Маслен лен (Linum usitatissimum) и/или
страхотен репей (Arctium lappa L) и/или
Лен и/или
Зародиши от Helianthus annuus (слънчоглед) и/или
Невен (Calendula officinalis) и/или
Echinops banaticus и/или
Mallotus philippinensis и/или
Рапица и/или
Сусам и/или
черен ким и/или
Cynoglossum officinale и/или
Лапахотея и/или
Arctostaphylos uva-ursi и/или
Каменно цвете (Flor de piedra) и/или
Прополис и/или
Primula Veris и/или
Magnolia officinalis и/или
Целина (Apium graveolens)
като липазни инхибитори.
Това може да се постигне систематично чрез активни съставки, които се абсорбират сами или се инактивират по време на храносмилането и по този начин се отстраняват от реакционното тегло с липаза-колипаза-мастен комплекс.
Прилагането на липазни инхибитори се счита за полезно лекарство за пациенти със симптоми на метаболитен синдром. В допълнение, инхибиращ липазата растителен екстракт или компоненти, изолирани от него, могат да се използват като хранителни добавки.
Използването на растителни екстракти като възможни инхибитори на липазата в храносмилателния тракт е описано от няколко патента. Това са японски приложения със следните номера: JP 2003 026 585, JP 2002 275 077, JP 2002 047 194 .
Положителните ефекти на растителните екстракти върху постпрандиалния липиден профил са описани в няколко публикации, а именно следните вещества като Zylokaria Paliurus, гроздови семки, градински чай, Cassia mimosoides, L. var. Nomame Makine и Alpinia officinarum.
В допълнение, изобретението си е поставило за задача да определи други растения, които могат да се използват като липазни инхибитори.
За да се реши този проблем, се споменават екстракти или есенции на следните вещества и техни смеси.
Кардамон
риган
мащерка
Люти чушки (Capsicum frutescens)
Вечерна иглика
Листа от риган (риган вугаре)
Листа от лайка (Chamomilla recutica)
Индийско орехче (Myristica fragrans)
Ябълково пюре (кюспе)
Зърнен зародиш
бадем
лешник
орех
Тиквено семе
Cuphea wrightii (e)
Вечерна иглика
Маслена лен (Linum usitatissimum)
страхотен репей (Arctium lappa L) (e)
Лен (д)
Кълнове от Helianthus annuus (слънчоглед) (д)
Невен (Calendula officinalis) (e, h)
Echinops banaticus
Mallotus philippinensis (e)
Рапица, (д)
Сусам
черен ким (съществително)
Cynoglossum officinale
Лапакотея (д)
Arctostaphylos uva-ursi
Каменно цвете (flor de piedra)
Прополис
Primula Veris
Магнолия лекарствена
Целина (Apium graveolens)
Описание на приготвянето на екстрактите а) СО 2 екстракти:
Екстракция под високо налягане със свръхкритичен въглероден диоксид. Не съдържа вода, захар или протеини.
Кардамон:
- Част от използваното растение: семена с капсули от Elettaria cardamomum.
- Суровината е получена от Гватемала.
- Консистенция на екстракт: мазна течност
- Екстрактът съдържа 72% етерични масла
- Други компоненти:
α-пинен, β-пинен, β-мирцен, 1,8 цинеол, линалоол, α-терпинеол, линалилацетат, терпинилацетат
- Част от използваното растение: Листа от риган майорана
- Консистенция на екстракт: мазна течност
- Екстрактът съдържа 80% етерични масла
- Други компоненти:
Сабинен, цис и транс Сабиненхидрат, Терпинен-4-ол, Сабиненхидратацетат
Част от използваното растение: листа от тимус вулгарис. Суровината е получена от Германия. За допълнителна информация вижте по-горе Кардамон.
Инхибиращите липазата вещества в растителните екстракти все още не са идентифицирани.
Описание на препарата и процедурата за определяне на ензимните активности. Приготвяне на тестовия разтвор
За да се приготви тестовият разтвор от екстрахиран прах и течен материал, 200 mg от екстрахирания материал се разтварят в 1 ml подходящ разтворител и се разбъркват енергично. След центрофугиране при 3400 оборота в продължение на 5 минути, полученият течен компонент се използва като тестов разтвор. За да се коригира съотношението между концентрацията на твърдите съставки и ензимната маса в последния експеримент, тестовият разтвор се разрежда в съотношение 1: 200, за да се определи алкалната фосфатаза.
За приготвяне на тестовия разтвор от екстракти от СО 2 и олеорезини, 100 μl мазен течен екстракт се разтварят в 900 μl подходящ ензимен буфер и се обработват с ултразвук при 100 вата за 5 минути.
Панкреатична липаза (панкреатична липаза)
Проведени са две определяния на липазата, за да се определи активността на панкреатичната липаза in vitro:
- 1. Анализът за определяне на липазната активност се състои от
- 200 μl 50 mM/L BICIN буфер (рН 8,0), съдържащ 1% техническа гума арабика.
- 50 μl разтвор на растителен екстракт и
- 25 μl от 0,35 mM/L разтвор на панкреатична липаза
Тази смес се инкубира в продължение на 20 минути при 37 °.
Окончателното измерване на активността на панкреатичната липаза се извършва в автоанализатор за клинична химия (Konelab, Kone), като се използва колориметър на липаза с диацилглицерол с метилрезоруфин на трето място като субстрат и колипаза и жлъчни соли като основни кофактори. Този процес е специфичен за панкреатичната липаза и се основава на ензимите, отделящи метилрезоруфин от субстрата.
Следната схема на пипетиране беше избрана за определяне на активността на панкреатичната липаза в автоанализатора:
- 1. 60 μl реагент 1: колипаза и холат
- 2. 2 μl разтвор за изпитване + 10 μl разтвор за измиване
- 3. 180 секунди инкубация
- 4. 40 μl реагент 2: колориметричен субстрат и холат
- 5. Инкубация за 120 секунди
Липазната активност се определя въз основа на 12 точки за измерване след 83 секунди. Метиловият резоруфин се измерва фотометрично при 75 нанометра.
- 2. Инхибирането на липазата под въздействието на растителни екстракти се определя с втори метод за измерване на активността на липазата, при който се измерва отделянето на свободни мастни киселини по време на хидролиза от триолеин от ензима.
Готов за употреба разтвор (реагент R1) се използва за приготвяне на инкубационната смес. R1 се състои от:
26 mmol/L Tris буфер, рН 9.2
19 mmol/L натриев дезоксихолат
0,1 mmol/L калциев хлорид
0,3 mmol/L триолеин
300 KU/L колипаза
Инкубационната смес се състои, както следва:
50 μL 26 mmol/L Tris буфер, рН 9.2
50 μL 9,7 mmol/L триолеинова емулсия в R1
50 μL 0,134 mol/L панкреатична липаза в 26 mmol/L Tris буфер рН 9,2
50 μL разтвор за изпитване
1% метил целулоза в 26 mmol/L Tris буфер (рН 9,2) беше използвана при изследването на екстрактите на CO 2.
След време на инкубиране от 30 минути при 37 ° на водна баня, реакцията се спира чрез добавяне на 3 ml смес хлороформ-хептан-метанол (50: 49: 1). Освободените свободни мастни киселини се екстрахират от реакционната смес чрез енергично разбъркване в продължение на 10 минути. След центрофугиране (3400 оборота, 10 минути) се получава 2 ml остатък от хлороформната фаза и 1 ml от меден реагент (94 ml чиста вода, 6 ml 1 N NaOH, 6,45 mmol/L на Cu (NO 3) 2, Прибавя се 0,1 mol/L триетаноламин, 33% (w/v) NaCl). Тази смес се разбърква енергично в продължение на 10 минути и се центрофугира при 3400 оборота в продължение на 10 минути. 1 ml се взема от супернатантата и се добавят 1 ml хлороформ при 0,1% батокупроин и 0,05 (w/v) 3-трет-бутил-4-хидроксианизол. Комплексът мастни киселини-мед-батокупроин най-накрая се определя фотометрично при 480 nm в стандартен фотометър.
За да се гарантира, че намаляването на липазната активност не се дължи на неспецифичен ензимен инхибитор или денатурация на ензимния комплекс, също се определя активността на α-амилаза и алкална фосфатаза. Инхибирането на α-амилазата може да доведе до намаляване на нивото на кръвната захар след хранене и се разглежда като допълнителен положителен ефект за пациенти с диабет.
Измерванията на активността на амилазата под въздействието на растителните екстракти се извършват, както следва:
Инкубационната смес за определяне на амилазната активност се състои от общо 250 μL:
- - 200 μL 50 mM/L MOPSO буфер (рН 8,0) с 1% гума арабика
- - 25 μL разтвор на растителен екстракт и
- - 25 μL 0,35 mM/L разтвор на а-амилаза
Тази смес се инкубира в продължение на 20 минути при 38 ° С. Окончателното измерване на активността на панкреатичната липаза се извършва в автоанализатор за химическа химия (Konelab, Kone).
Принцип на химична реакция:
- 1. Етилен-р-нитрофенол- (глюкоза) 7 → етилен- (глюкоза) 3-4 + ρ-нитрофенол- (глюкоза) 2-4
- 2. Остатъци от ρ-нитрофенол (глюкоза) → ρ-нитрофенол (λ = 405 nm) + глюкоза
Процедурата с пипетиране в автоанализатора за определяне на дейностите на а-амилазата се извършва, както следва:
- 1. 120 μL реагент: субстрат + α-глюкозидаза
- 2. 300 секунди инкубация
- 3. 3 μL разтвор за изпитване
- 4. 180 секунди инкубация
Активността на α-амилазата се определя чрез измерване на 5 точки за 120 секунди.
Измерването на активността на алкалната фосфатаза под въздействието на растителни екстракти се извършва, както следва:
Инкубационната смес за определяне на липазната активност се състои от
- - Съдържащ 200 μL от 50 mM/L HEDTA буфер (pH 8,0),
- - 25 μL тестов разтвор на растителен екстракт и
- - 25 μL от 0,014 mM/L разтвор на алкална фосфатаза
Сместа се инкубира в продължение на 20 минути при 22 ° С.
Окончателното измерване на активността на панкреатичната липаза се извършва в автоанализатор за клинична химия (Konelab, Kone).
Уравнение на реакцията
- 2-амино-2-метил-1-пропанол + 4-нитрофенил фосфатен естер → (2-амино-2-метил-1-пропаноо) фосфат + 4-нитрофеноксид (λ = 409 nm)
Процедурата с пипетиране в автоанализатора за определяне на активността на алкалната фосфатаза е както следва:
- 1. 150 μL реактив
- 2. 300 сек. Инкубация
- 3. 3μL разтвор за изпитване
- 4. Инкубация за 120 сек
Активността на алкалната фосфатаза се определя, като се използват 5 точки за измерване за 22 секунди.
Резултати% ензимно инхибиране при ензимни тестове: