Колебания във времето на задържане - Част 1 SHIMADZU DEUTSCHLAND
9 - време на задържане част 1
10 - време на задържане част 2
11 - Живот на колона - Част 1
12 - Живот на колона - Част 2
Най-често срещаните видове детекция при HPLC са UV абсорбция, флуоресценция и индекс на пречупване. Тези видове откриване не са специфични за веществото и в повечето случаи аналитите се определят чрез времето на задържане. Ако времето на задържане варира, може да възникнат неправилни резултати. Следователно възпроизводимостта на времето на задържане е от голямо значение.
В следващата, както и през следващата седмица, са представени различните влияния.
1. Влияние на температурата
Както при много проблеми при HPLC, температурата също влияе върху времето на задържане. Колкото по-висока е температурата, толкова по-нисък е вискозитетът на подвижната фаза. Следователно обратното налягане в системата също намалява с повишаване на температурата. Като правило, промяната на температурата с 1 ° C води до 1 до 2% промяна във времето на задържане. Следователно, изместването на времето поради температурни колебания е по-голямо за късно елуиращите аналити. В следващите четири парабена бяха измерени при различни температури.
Ако сравните измерването при 20 и 50 ° C, общото време на работа е почти наполовина. Това влияние, разбира се, може да се използва и за оптимизиране или съкращаване на метода, при условие че то остава в спецификациите на колоната. При много високи температури обаче може да се очаква повечето колони да имат по-кратък експлоатационен живот.
Ако обаче температурата трябва да се използва за оптимизация, трябва да се отбележи, че не всички анализи реагират по еднакъв начин на промяна на температурата. Както е показано в примера вдясно, те могат да се държат много различно. Докато аналитите се разделят при 20 ° С, сорбиновата киселина и бензоената киселина се елюират при 30 ° С. Ако температурата се повиши допълнително, последователността на елуиране може дори да бъде обърната. Ако това не бъде забелязано, тук също могат да възникнат неправилни резултати.
В най-добрия случай използвайте колонна фурна, за да поддържате температурата на вашата колона възможно най-постоянна.
1: Сорбинова киселина, 2: Бензоена киселина, 3: Метилпарабен
2. Промяна в дебита
Всяка помпа има определен брой консумативи, които трябва да се сменят на редовни интервали. Така са и напр. повечето уплътнения на буталата са определени за пренасяне на определен обем. Ако износването е напреднало твърде много, те могат да изтекат и по този начин да повлияят на скоростта на потока. Ако времената на задържане варират, дефектната помпа също може да бъде проблем.
Най-лесният начин да проверите помпите е да ги измервате. За да направите това, вземете измервателен цилиндър, свържете капиляра за противоналягане директно към помпата и настройте дефиниран поток. Сега сравнете времето, през което се изпомпва определен обем, със зададения дебит.
Проверявайте редовно консумативите на вашата HPLC. Също така поддържайте резервните части готови, така че дефектните части да могат бързо да бъдат заменени.
За съжаление, всички мерки, които водят до стабилизиране на хроматографските условия, са малко полезни, ако работите с много стабилни методи. При такива условия дори малки промени напр. температурата или елуентът оказват голямо влияние върху времето на задържане.
В резултат на това пробите често трябва да се повтарят или оценката да се преработи ръчно. Това е голям проблем, особено в регулирана среда.
По-добре е да инвестирате повече време в разработването на надеждни методи. В ретроспекция ще имате по-малко усилия и повече време в рутината, а времето, инвестирано преди това, ще се амортизира много бързо.
Неща, които трябва да обмисляте всеки ден:
Общ:
- Провеждайте редовни тестове за правоспособност
- Проверявайте редовно консумативите
- Документиране на времената на задържане, разтварянето и т.н. на референтните разтвори
Система:
- Използвайте колонна фурна за контрол на температурата
- Водете дневник на колона
- Поддръжка на документи
Следващата седмица, с влиянието на състава на елуента, колоната и времето за уравновесяване, също има тема на колебанията във времето на задържане.