In vitro експерименти върху действието на фуразолидон, хостациклин, хлорамфеникол и
Документи
От Федералния изследователски институт за развъждане на дребни животни, Целе
Експерименти in vitro върху ефектите на фуразолидон, клиника за заложници, хлорамфеникол
и дихидрострептомицин върху Salmonella pullorum
През 1954 г. COSGKOVE; ГРУБКИ и персонал; HARWOOD и STUNZ, както и SMITH посочиха пригодността на фуразолидон за лечение на инфекция с Salmonella pullorurn при домашни птици. SMITH (1954b), WILSON (1956), TITKEMEYER и SCHMITTLE (1957), BELDINC и MAYER (1958) установяват при сравнителни проучвания, че фуразолидон превъзхожда използваните преди това сулфонамиди и антибиотици по отношение на лечебния ефект. Но дори и с този препарат не е възможно напълно да се изключат латентните носители на зародиши сред клинично здравите животни, както показват многобройни проучвания: [SMITH (1954b и 1955); ГОРДОН и ТАКЪР (1955); ХАРБЪР И ПРОДАВАЧ (1955); LUCAS (1955); УИЛСЪН (1955 и 1956); GYLSTORPF и DORN (1956); HARBOR (1956); SMYSER и VAN ROCKEL (1957); AYACARDI (1958); BELDING и MAYER (1958); HENDERSON et al. (1958) l.
Тези твърдения се основават предимно на експерименти с животни. Експерименти in vitro върху действието на фуразолидон върху физиологичен разтвор. pullorum микроби са били използвани само в ограничена степен. Засегнатите автори се занимават предимно с определяне на дозите, необходими за обещаваща терапия [YUKCHENCO and YURCHENCO (1953); СМИТ (1954 а и б); ROGERS и колеги (1956) l. Освен това интерес представляват следните въпроси, чието изясняване може да помогне за оценка на пригодността на даден препарат за терапия:
I. Могат ли да се очакват устойчиви бактериални щамове на практика? 2. От съществено значение е да се вземат предвид в терапевтичната доза
Открийте разликите в чувствителността между различните щамове?
3. Има ли препаратът бактериостатичен или бактерициден ефект?
Ефект на фуразолидон, хостациклин и др. Върху Salmonella pullorum 95
4. До каква степен резистентността към лекарството може да бъде провокирана при пулорум микроби и дали това е обратимо или постоянно?
5. При дългосрочни, ниски дози от препарата се получава стимулиране на растежа на зародиша?
6. Дали микробите, които са станали резистентни, също губят чувствителността си към други препарати (кръстосана резистентност)? По-обширните експерименти in vitro трябва да дадат отговор на това
Намерени са въпроси. В допълнение към фуразолидон, ние включихме представител на тетрациклиновата група (хостациклин), както и хлорамфеникол и стрептомицин в нашите изследвания.
За тестовете бяха използвани общо 24 щама за събиране, които бяха изолирани от материали с различен произход между 1955 и 1957 г. и идентифицирани като Salmonella pullorurn. Под щам трябва да се разбира генетично еднородни микроби, произхождащи от индивидуално съхранявана колония (за отделен щам приехме две отделни колонии, които след това бяха обозначени като a и b).
Всички експерименти, в които трябваше да се определят ефективните концентрации на препарата, бяха проведени с помощта на разреждането в епруветката, което приложихме със степен на две. Дадените стойности се отнасят до 1 ml и се основават на следните дози, които никога не са били използвани по-стари от 24 часа: 1. Фуразолидон 0,01 g с 4 ml диметилформамид ') като разтворител
(Furoxon Boehringer, Mannheim) в 96 ml хранителен разтвор = 100 ylml 2. Тетрациклин 0, масло g
(Hostacyclin Hoechst) в 100 ml хранителен разтвор = 100 ylml 3. Хлорамфеникол O, OI g
(Boehringer, Mannheim) в 100 ml хранителен разтвор = 100 μg/ml 4. Дихидрострептомицин сулфат 0,1 g
(Bayer, Leverkusen) в 100 ml хранителен разтвор = 1000 y/ml Използваният хранителен разтвор се състои от:
1,8 g Vitamin Bakt. 1,0 g декстроза 0,5 g пептон 0,3 g NaClO, 2 g сек. Натриев фосфат 0,1 ml бромотимолово синьо (1,6% алкохол)
като цветен индикатор в 100 ml дестилирана вода. Коригирано до рН 7.2 с NaOH.
Посяването на микроби във всяка епруветка се извършва равномерно с капка от пипета от 1 ml от 6-часови бульонни култури, които са били инокулирани с вещество. Растежът на микробите или инхибирането на микробите се отчитат от промяната на цвета след 24 часа пилинг. Разреждането, при което не е настъпила промяна на цвета в трите паралелни реда за разреждане, се счита за стойност на инхибиране.
От всички разреждания бяха направени намазки върху ендо и агарова почва, за да се провери чистотата на културите веднъж и за
I) Диметилформамидът има инхибиращ ефект върху растежа на бактериите до разреждане 1: 100. В настоящата схема за изпитване тази концентрация пада под 2-3 (0,5 O/o диметилформамид).
други да могат да решат дали и до каква концентрация на препарата е налице бактерицидно или само бактериостатично действие.
За провокиране на резистентност са използвани три щама (№ 11, 12 и новоизолираният щам 99). Бактериите се култивират в концентрацията на препарата, която просто позволява на микробите да се размножават, и в по-високите концентрации. Ако микробите растат добре през 24-часовите пасажи, съответно по-ниските разреждания се използват за по-нататъшно размножаване. За тези експерименти е разрешено фуразолидон да се разтваря само в 0,4 ml диметилформамид. Трябва да се приеме непълно решение на препарата (виж F u h o t e 1).
Контролът на растежа на провокационните пасажи, създадени с бактериите, които са станали резистентни, показват дали е възникнал навик в смисъл на стимулиране на растежа.
След 30 провокационни пасажа (дихидрострептомицин 8 пасажа) микробите се хранеха на всеки 24 часа в обикновен хранителен разтвор за още 30 пасажа и тяхната чувствителност към препарата се тестваше от време на време в теста за изтъняване на тръбата.
Микробите, които са станали нечувствителни към единия препарат, са тествани за кръстосана резистентност с другите препарати.
Таблица 1 показва инхибиторните концентрации на фуразолидон, хостациклин, хлорамфеникол и дихидрострептомицин, определени in vitro за 24 тествани сьомги. посочени са щамове на пулор. Таблицата също така показва концентрациите, при които препаратите са имали бактерициден ефект.
Предимно устойчиви щамове на Salm. pullorum не може да бъде намерен във всеки случай. От друга страна, при хостациклин, хлорамфеникол и стрептомицин са установени разлики в чувствителността между отделните щамове, установено е, че трите степени на разреждане и при фуразолидон четири степени на разреждане са недостатъчни. Изразено в тегловни единици на ml хранителна среда, чувствителността към фуразолидон варира между 6.25 y и 0.39 y; с хостациклин и хлорамфеникол между 0,78 y и 0,095 y и с дихидрострептомицин между 250 y и 3 1,25 y.
Хостациклин е имал най-добри инхибиторни стойности - последван отблизо от хлорамфеникол. Фуразолидон трябваше да се дозира средно с почти десет пъти, а дихидрострептомицин с 300 пъти по-високо, за да се постигне същия инхибиторен ефект in vitro. Но дори дозата на хостациклин от 100 ylml (2 4 = най-високата тестова концентрация) е довела само до бактериостаза; тъй като бактериите, способни да се размножават, могат лесно да бъдат открити от изтъняванията, при които не се наблюдава растеж на зародиши от промяна в цвета. В случай на хлорамфеникол, 5 е 0 y и 2 5;
/ d за определяне на бактерициден ефект. Фуразолидон и стрептомицин вече са бактерицидни (фуразолидон 12,5 7; дихидрострептомицин 250 7), когато концентрацията се увеличава два пъти или четири пъти, измерена спрямо дозите, необходими за инхибиране на микробите. Широкият диапазон между инхибиторни концентрации и концентрации с бактерицидни свойства с хлорамфеникол и особено с хостациклин става очевиден, когато серията разреждания се оценява чрез повече или по-малко течни преходи в промяната на цвета, докато цветната индикация за дихидрострептомицин Фуразолидон рязко изтеглен.
Излагане на фуразолидон, хостациклин и др. 3uf Salmonella pullorum 97
T a b e l l e I H e m m w e r t e u n d K o n z e n t r a t i o n m i t b a k t e r i z i d e r W i r k u n g v o n F u r a z o l i d o n, H o s t a c y c l i n, C h l o r a m p h e n i c o -
s t r e p t o m y c i n g e g e n i i b e r 2 4 S a l m. p u l l o r u m - S t a r n m e n
Фуразолидон хостациклин хлор- дихидро- амфеникол стрептомицин л) щам Wacfis- восък- предупредителен восък-
инхибират. инхибират. инхибират. хемрнг. завой- бактерицид завой- бактерицид тум- бактерицид тум- бактерици,