Имунологични реакции
Имунологичните реакции се използват за откриване на специфични антитела, идентифициране на патогени и други антигени, определяне на кръвни групи и избор на адекватен донор за трансплантация на органи и тъкани.
Серологични реакции - реакции между антигени и антитела in vitro - използвани за откриване на неизвестен антиген или антитяло, използвайки съответно известно антитяло или антиген. Корпускуларните антигени дават явлението аглутинация, разтворимите антигени - утаяване. В лабораторната практика се използват реакции на аглутинация, утаяване, свързване на комплемента и др.
Антигените, по които индивиди или групи индивиди от един и същи вид се различават помежду си, са изоантигени. Изоантигените, генетично свързани, се комбинират в групи, получили имена: системата ABO, резус и др.
Човешката плазма винаги съдържа естествени, пълни, студени изоантитела към аглутиногени А и В.
Аглутинин анти-А - а-аглутинин и аглутинин анти-В - b-аглутинин.
Определяне на кръвна група (определяне на аглутиногени). Реакцията на аглутинация, използвайки стандартни серуми, определя груповите аглутиногени в еритроцитите. Ампули или флакони със стандартни серуми от две различни серии от всяка група се поставят в 2 стелажа с 3 гнезда или в 1 стелаж с два реда гнезда. Отляво надясно поставете серуми от групи 0 α-b (I), A b (II), B α (III). Серум AB0 (IV) се поставя отделно. Определянето се извършва върху бели чинии или плочи. От лявата страна направете надписите 0 α-b, в средата - А b, отдясно - В α. Под съответния надпис се прилага 0,1 ml от всеки стандартен серум с пипета поотделно за всеки серум. Кръв за изследване се взема от пръст, 0,01 ml кръв се нанася със суха стъклена пръчка до всяка капка стандартен серум.
Капки стандартен серум се смесват с тестваната кръв. След това плочата се разклаща, след това се оставя сама за 1-2 минути и отново периодично се разклаща. Наблюдението на хода на реакцията се извършва в продължение на най-малко 5 минути, въпреки факта, че аглутинацията започва през първите 10-30 секунди, тъй като е възможна късна аглутинация, например от еритроцити от групата А2 (II). Тъй като аглутинацията настъпва, но не по-рано от 3 минути по-късно, към онези капки, в които е настъпила аглутинация, се добавя изотоничен разтвор на натриев хлорид и наблюдението продължава, докато плочата се люлее 5 минути, след което се оценява резултатът. При положителна реакция в сместа се появяват малки червени зърна (аглутинанти), видими с просто око, състоящи се от залепени еритроцити. В този случай серумът е напълно или частично обезцветен.
В случай на отрицателна реакция през цялото време на наблюдение (5 минути), течността остава равномерно оцветена в червено и в нея не се откриват аглутинати. Резултатите от реакцията на капки със серуми от една и съща група от двете серии трябва да бъдат еднакви. Възможни са различни комбинации от реакции:
1) серумите и на трите групи дадоха отрицателна реакция - изследваната кръв принадлежи към група 0 (I);
2) серуми от групи 0 α-b (I) и B α (III) дадоха положителна реакция, а серумът от група A b (II) - отрицателен: изследваната кръв принадлежи към група A (II);
3) серуми от група 0 α-b (I) и A I (II) дадоха положителна реакция, а серумът от група B α (III) - отрицателна: изследваната кръв принадлежи към група В (III);
4) серумите от всички групи дадоха положителна реакция. В този случай, за да се изключи неспецифичната аглутинация, се извършва допълнително контролно проучване със стандартен AB0 (IV) серум.
Липсата на аглутинация в капка от този серум, в присъствието му във всички останали, позволява кръвта да бъде класифицирана като AB0 (IV). Наличието на аглутинация със серума на групата AB0 (IV) говори за неспецифична аглутинация. В тези случаи изследването трябва да се повтори с измити еритроцити.
Определяне на пълната формула на кръвната група (аглутиногени и аглутинини). Едновременното определяне на груповите антигени на еритроцитите и серумните аглутиногени позволява да се установи пълната групова формула на изследваната кръв. За целта вземете 2 различни серии стандартни серуми от кръвни групи 0 α-b (I), A b (II), B α (III), AB0 (IV); 0,85% разтвор на натриев хлорид; стандартни еритроцити от групи 0 (I), A (II), B (III). В центрофужна епруветка, съдържаща 0,25-0,5 ml 3,8% разтвор на натриев цитрат, добавете 2-4 ml кръв от специално подбрани донори, след което епруветката е 3/4 пълна с изотоничен разтвор на натриев хлорид. Разбърква се, центрофугира се и се оставя да престои до утаяване на еритроцитите. Измитите стандартни еритроцити се съхраняват в хладилник. Срокът на годност е 2-3 дни. Ампулите със стандартни серуми от две различни серии от всяка група са поставени в 2 стелажа. Серумът от група AB0 (IV) се поставя отделно. Епруветките със стандартни еритроцити се поставят в отделен багажник с три слота в реда: група 0 (I), A (II) и B (III). На плочата се правят надписи отляво надясно: 0 α-b, A b и B α за стандартни серуми и 0, A и B - за стандартни еритроцити. 1 голяма капка от всички стандартни серуми и 1 малка капка от стандартните еритроцити се прилагат под подходящите обозначения. Кръвта, която трябва да се изследва, се центрофугира за отделяне на серума или се оставя да престои 20-30 минути. Тестовият серум, 1 голяма капка, се капе върху подготвени стандартни еритроцити. След това със същата пипета се вземат от дъното еритроцити на изследваната кръв и се нанася 1 малка капка до всяка капка стандартен серум. Серумът се смесва старателно с еритроцити със сухи стъклени пръчки. След 1 минута към онези капки, в които е настъпила аглутинация, се добавя изотоничен разтвор на натриев хлорид и наблюдението продължава, докато плочата се люлее, докато изтекат 5 минути.