Идентифициране на дерматофити - масспектрометрия (система MALDI-TOF) Биоклиника

Общ преглед

Дерматофитите или дерматофитните гъби са нишковидни микромицети кератофили, класифицирани таксономично в реда Onygenales, семейство Arthrodermataceae и са потенциални патогени на хора и животни. От морфологична гледна точка е характерно наличието на два вида конидии: микроконидии (с една клетка) и макроконидии (с няколко клетки, наричани още ложи).

Техните несъвършени (безполови) стадии, наричани още анаморфни форми, са групирани в три рода - Epidermophyton, Microsporum и Trichophyton, докато перфектните (сексуални) етапи, известни като телеоморфни форми, са включени в рода Arthroderma.

Екология

При естествени условия дерматофитите имат способността да разграждат кератина. Тази метаболитна способност им позволява да оцеляват в околната среда и понякога да произвеждат повърхностни заболявания с местоположение на кожата, косата или ноктите - при хора и животни.

В зависимост от вида на кератина, използван за предпочитане, видовете дерматофити се разделят на три категории:

Геофилите използват девитализиран кератин от люспести клетки, косми и други фрагменти от ажури, които се намират в околната среда, особено в почвата. Рядко могат да се появят заболявания при хора и животни; предаването между индивидите е почти нулево.
Зоофилите имат тропизъм за кератина в кожата и космената покривка на животните. Засяга предимно животни, въпреки че някои могат да се предадат изключително лесно на хората. Междуличностното предаване, макар и възможно, е изключително ниско.
Антропофили, главно паразитират върху човешки кератин. Те произвеждат заболявания при хората, понякога се характеризират с висока степен на заразяване.

Геофилни видове Зоофилни видове Антропофилни видове

М. cookei	М. canis	Д. флокозум
M. gypseum	M. gallinae	М. audouinii
М. praecox	М. нанум	M. ferrugineum
T. ajelloi	M. persicolor	Т. концентрик
T. terrestre	T. erinacei	T. menthagrophytes var. интердигитален
Т. vanbruseghemii	T. menthagrophytes var. менатгрофити	T. rubrum
T. simii	Т. schoenleinii
T. tonsurans
T. violaceum
T. soudanense

Епидемиологични особености

Източниците на замърсяване и начинът на предаване са особено важни епидемиологични характеристики в процеса на идентифициране на засегнатите видове; например контакт с малки диви бозайници или домашни любимци може да бъде причина за свиване на дерматофити, произведени от зоофилни видове носители. От друга страна, междуличностният контакт или извършването на определени спортни дейности могат да предразположат към появата на инфекции с предимно антропофилни видове дерматофити.

Разпространението на дерматофитна инфекция сред общата популация е 10-20%.

Спецификацията от страна на клинициста в препратките, предназначени за лабораторен лекар, на някои анамнетични данни с епидемиологичен характер е не само препоръчителна, но и задължителна, като осигурява висока степен на точност на идентифицирането на въпросните дерматофитни видове.

Клинични аспекти

Дерматофитите лесно атакуват епидермиса и фасетите - кератинизирани анатомични структури
Локалната възпалителна реакция е с различна степен на интензивност, в зависимост от участващия дерматофит и имунния статус на заразения гостоприемник.
По изключение увреждането на тъканите може да премине към по-дълбоки структури; е случаят с дерматофитна болест (болест на Хадида-Шусбое) и мицетоми, причинени от някои дерматофити.

Класификация на клиничните аспекти - повърхностни дерматофити

Epidermofiţii

Кръгов епидермис (цирцинатен "херпес"), най-често срещаната форма на tinea corporis
Ингвинална интертриго (tinea cruris)
Intertrigo interdigito-plantar (най-честата проява на tinea pedis)
Плантарни хиперкератозни лезии („външен вид на мокасин“)
фоликулит
Токелау (вложен тинея)
Други епидемофити (комбинации еритема-везикули-ерозивно-кора)

Pilomicoze

Tinea capitis (срязващи микроспорични и трихофитни заболявания, керион, фавус)
Лигавици на лицето (сикоза)

Онихомикоза (tinea unguium)

Дистална субунгвална онихомикоза
Проксимална субунгвална онихомикоза
Повърхностна левкемия
Тотална ониходистрофия

Мицеланея

Дерматофитно заболяване

Дерматофитен мицетом

жътва

лабораторният лекар трябва да бъде информиран за редица важни аспекти, особено полезни за диагностициране: вида на нараняването, професията на пациента (ако се подозира някаква връзка със заболяването), всички домашни любимци, с които е контактувал, пътуванията на пациента в чужбина, влизане в контакт с хора от ендемични зони за някои дерматофити, посещаващи басейни, фитнес зали, фитнес клубове или салони за красота в периода, предшестващ появата на лезии.
за предпочитане пробите се събират преди приложението на противогъбични средства (в случай на локални препарати се препоръчва интервал от поне 5-7 дни от последното приложение)
не се препоръчва предварително обеззаразяване на зоната за събиране, тъй като жизнеспособността на гъбичните елементи и получаването на отрицателни култури могат да бъдат засегнати.

космите се събират с чифт пинсети, за предпочитане под UV светлина, в тъмна стая. Изпраща се в лабораторията в стерилен контейнер. Максимално време в режим на готовност: 72 часа при стайна температура.
фрагменти от нокти се събират от кръстовището на здрава тъкан със засегнатата, чрез изстъргване със стерилен кюретаж или чрез изрязване с ножица. Изпраща се в лабораторията в стерилен контейнер. Максимално време в режим на готовност: 72 часа при стайна температура.
кожните люспи се събират чрез изстъргване на активната област на лезията (обикновено периферна) със стерилна кюрета или чрез натискане и многократно избърсване със стерилен тампон, предварително навлажнен със стерилен физиологичен разтвор. Вземането на проби с тампона се препоръчва в случай на обрязани дерматофитни лезии и включва незабавно засяване на пробата върху изолираща среда.
мокрите лезии се вземат със стерилни тампони, които се изпращат в лабораторията в транспортна среда.

ВНИМАТЕЛЕН! Дерматофитите се унищожават, ако се съхраняват при 4-6 ° C.

Директно микроскопско изследване

Той е задължителен, позволява бързо потвърждаване на съмнението за дерматофитна инфекция и информацията на клинициста, много преди положителното на културата.

Култура

Изолирането на патогенни гъби се благоприятства от засяването на проби, взети върху твърда среда, съдържаща циклохексимид, вещество, способно частично или напълно да инхибира развитието на замърсяващи гъби. Изолирането в лабораторни условия на гъбички от патологични проби, независимо от тяхното естество, е безспорна необходимост за разбиране на инфекциозния процес и за започване на противогъбична терапия.

Идентифициране на дерматофитни гъби чрез масспектрометрия

Класическите методи за идентифициране на дерматофитни гъби се основават на наблюдение на макроскопични признаци (пигментация, режим на растеж, структура на колониите), на използването на селективни културни среди и микроскопско изследване на макро/микроконидии. Тези методи са изключително трудоемки.

Понастоящем системата MALDI-TOF, използваща масспектрометрия, е отлична алтернатива на конвенционалните методи за идентификация.

Тълкуване на резултатите

Положителен резултат при нативно микроскопско изследване

Наличието на елементи, предполагащи гъбична инфекция, е достатъчно за започване на лечението, но не гарантира получаването на положителни култури.

Отрицателен резултат от микроскопия, положителен в културата

Показва ниско количество дерматофитни гъбички в пробата, събрани близо до засегнатата област. Показано е противогъбично лечение.

Отрицателна култура, положителен резултат при директна микроскопия

Това може да се дължи на реколта в центъра на лезията, където дерматофитите вече не са жизнеспособни, и може да е следствие от предишно противогъбично лечение. 33% от пробите на ноктите дават фалшиво отрицателни култури.

Значение на изолирането на гъбички от проби

В повечето случаи изолирането на дерматофитни гъби има клинични последици. Сапрофитни гъби (Scopulariopsis brevicaulis, Fusarium sp.) Се появяват вторично вследствие на дерматофитна инфекция или травма.

За фрагменти от нокти препоръчваме многократно събиране, ако са изолирани в културата на Fusarium sp., Aspergillus или Acremonium sp.