Хормонална диагностика на бременността - диагностични методи
Методите за хормонална диагностика на бременността се основават на откриването на хорион гонадотропин (HCG) в урината на жена, за която се подозира, че е бременна. За тази цел са предложени различни тестови обекти: мишки, плъхове, зайци, жаби.
Според тежестта на промените, които настъпват в яйчниците на животните под въздействието на инжектираната CG, се различават 3 вида реакции: 1-ва реакция се характеризира с наличие на узряващи фоликули с натрупване на гранулозни клетки около яйцеклетката. С 2-ра реакция във фоликулите се образуват кръвоизливи (кръвни точки). Третата реакция се характеризира с образуването на жълти тела в яйчниците. Първата реакция не е специфична за бременността, тъй като е положителна при наличие на повишено количество фоликулостимулиращ хормон на хипофизната жлеза, когато функцията на яйчниците е депресирана или напълно изключена, като например в менопаузата. Ако има бременност, 2-ра и 3-та реакция трябва да са положителни.
Най-често срещаните са Реакция на Ашхайм - Цондек върху незрели женски мишки, върху възрастни женски мишки, реакция на Фридман при възрастни зайци и реакция на сперматозоиди Гали-Майнини върху мъжки жаби или жаби.
Реакция на Ашхайм - Цондек
Същността на реакцията се крие във факта, че урината на бременна жена, инжектирана под кожата на незрели женски бели мишки, причинява промени в репродуктивния апарат в тях, съответстващи на 2-ра и 3-та реакции. Урината на небременна жена не причинява такива промени или, в краен случай, може да се появи само 1-ва реакция.
След 96-100 часа животните се убиват с етер или се обезглавяват и коремната кухина се отваря. При положителна реакция промените в яйчниците могат лесно да бъдат открити с просто око или с лупа. В неясни случаи се препоръчва да се изрежат яйчниците, да се изплакнат с вода и да се поставят върху предметно стъкло в капка глицерин. След 10-15 минути яйчниците стават бледи и на този фон кръвните точки се появяват особено ярко. Според К. М. Фигурнов (1935) в 10% от случаите, за да се реши проблемът, трябва да се прибегне до микроскопско изследване. Реакцията на Ашхайм-Цондек дава верния отговор в 98%. След отстраняване на яйцеклетката от тялото, реакцията може да бъде положителна за още 8-10 дни.
Диагностика на бременността при възрастни мишки (реакция на Ескин и Фрейдович)
Реакция на Фридман
Полово зрелите зайци се използват като биологичен тест за диагностика на бременност. Те нямат спонтанно избухване на зрели фоликули и образуване на жълти тела. Тези процеси протичат само след като заекът е покрит от мъжки в резултат на рефлекторно възбуждане на предната хипофизна жлеза и освобождаване на гонадотропни хормони. След хипофизектомия, извършена в първите часове след чифтосването, фоликулите не се пукат. Въвеждането на 24 ml урина на бременна жена във ушната вена на заек за 2 дни (4 ml 6 пъти) води след 48 часа до кръвоизливи във фоликулите и началото на образуването на жълто тяло.
Същият заек може да се използва в експеримента 5–6 пъти (в случай на отрицателна реакция следващият експеримент се провежда след 1,5–2 седмици, с положителна реакция - не по-рано от 1 месец). Реакцията на Фридман дава верния отговор в 98-99% от случаите.
Диагностика на бременността при мъжки жаби
Биологичният тест за бременност, който се провежда върху мъжки жаби, стана широко разпространен. Гонадотропните хормони на хипофизната жлеза засягат половите жлези на индивиди от двата пола. Хипофизните гонадотропини и hCG действат идентично върху репродуктивния апарат на мъжките жаби, причинявайки освобождаването на сперматозоиди в клоаката. Този принцип се основава на Реакция на Гали-Майнини . Установяването на реакция е много евтино, защото жабите не изискват никакви специални грижи. Те се държат в хладно, полутъмно помещение в купа с малко количество вода, която трябва да стои под лек ъгъл, така че част от дъното да не е покрита с вода. Водата трябва да се сменя ежедневно. При такива условия жабите могат да живеят дълго без храна. Няколко часа преди експеримента жабите трябва да бъдат доведени до стаята, където ще се проведе реакцията, така че да се адаптират към стайната температура.
От жабите, обитаващи Съветския съюз, езерните жаби (Rana ridibunda) са най-чувствителни към CG, след това зелените (Bufo viridis) и обикновените жаби (Bufo bufo), най-малко чувствителни към CG са жабите от езерце (Rana esculenta). Най-често за инсцениране на реакция се използват блатни жаби, които реагират на CG цяла година. За експеримента се вземат полово зрели мъже с тегло от 50 до 75 g и дължина 6-7,5 см. Мъжките се различават от женските по това, че имат голяма царевица на първия пръст на предните си лапи.
Реакцията се поставя върху 2 жаби. Съдържанието на клоаката се изследва предварително за наличие на сперма. За това от клоаката се взема капка течност с очна пипета, нанася се върху предметно стъкло и се изследва под микроскоп. Ако се открият сперматозоиди, жабата се изключва от експеримента.
Прясна сутрешна урина в количество 3-5 мл се инжектира в лимфната торбичка, разположена под кожата на гърба. След 2 часа резултатът се записва. Ако реакцията е положителна, сперматозоидите се намират в клоаката. Те се гледат под микроскоп при ниско увеличение в леко засенчено зрително поле. Реакцията се счита за положителна, ако има много сперматозоиди и повечето от тях са подвижни. Ако броят на сперматозоидите е малък (2-5), реакцията трябва да се повтори.
Жабите могат да се използват повторно за реакцията, но ако животното реагира положително 5-6 пъти, чувствителността му към CG постепенно намалява. В случай на положителна реакция, тази жаба може да се използва в следващия експеримент не по-рано от една седмица; ако резултатът е отрицателен - след 2-3 дни.