Фракциониране на млякото и изследване на някои от неговите компоненти - PDF безплатно изтегляне

1 Университет в Кьолн Институт по зоология WS 2000/2001 Упражнения за напреднало обучение: Физиология на животните B Фракциониране на млякото и изследване на някои от неговите компоненти

2 1. Въведение На този ден от стажа се занимавахме с мляко от бозайници, изследвайки само краве мляко. Тъй като млякото от бозайници е единственият източник на храна за новородени, може да се приеме, че съдържа всички основни хранителни вещества за този вид. По този начин може да се направят заключения относно хранителните нужди на този вид. За това млякото се разделя на части от него. Това са протеини (особено казеин), мазнини, въглехидрати (особено лактоза), минерали (особено калций) и витамини. 2. Материал и методи Ad 1.3: Пробата от мляко се приготвя с 2 ml мляко и 2 ml вода. В противен случай тестовете бяха извършени, както е описано в сценария. 3. Резултати 1. Разделяне на казеините (изоелектрична точка) 1.0 Киселинно утаяване Когато се достигне стойност на рН 4.6, може да се наблюдава утаяване на казеина. 1.1 сирищни валежи: Таблица 1: скорост на сирищни валежи ml време на сирище [s] стр. 2 от 2

3 1.3 Контролен експеримент за утаяване със сирище Съставът на използваните контролни партиди е показан в таблица за изясняване: За да се установи кой йон може да предизвика утаяване на млякото Таблица 2: Преглед на партидите за контролната тестова партида № Реагент Liquorion (варен) EDTA CaCl MgCl FeCl NaCl Наблюдавани валежи? не да да да не не не не да не + добавен реагент, - не добавен реагент Страница 3 от 3

4 2. Характеризиране на млечния протеин: На базата на известните аминокиселинни смеси успяхме да присвоим добре отделните ленти в TLC. Съгласно това в казеина се съдържат следните аминокиселини: His, Arg, Lys, Gly, Ser, Asp, Thr, Glu, Pro, Ala, Val, Met, Ile, Phe, Leu Лентата на аланина беше толкова слаба, че тук окончателна Не може да се направи изявление. За валин и метионин, както и за фенилаланин и левцин, лентите се припокриват по такъв начин, че не е възможно ясно идентифициране. Успяхме да определим следния AS от пробата желатин: Thr, Hypro, Ala, Met/Val, Pro, Phe. В този случай идентифицирането на Met и Val на базата на лентите не беше ясно възможно. Според нашата DC, най-важната аминокиселина в желатина по отношение на количеството ще бъде треонинът. Според структурната формула обаче тази позиция трябва да бъде отредена на глицин. Страница 4 от 4

5 3. Характеризиране на млечната мазнина 3.1 Йодно число Йодното число се определя от количеството на титрувания Na 2 S 2 O 3, като се използва следната формула: g йод (10 ml 0,1 n Na2 S 2O3) 0, йодно число = 100 g мазнина g определена мазнина Таблица 3: Определяне на йодното число ml Na 2 S 2 O 3 йодно число [g йод/100 g мазнина] mol йод/100 g маслено масло 6,3 42,68 0,34 6,4 41,53 0,33 зехтин 1,4 99 .21 0,78 1,8 94,6 0,75 Ленено масло 1,7 191,5 1,51 1,3 200,73 1,58 Примерно изчисление: 42,68 g йод/100 g мазнина (йодно число) = 0, 34 mol йод/100 g мазнини 126,9 (молекулно тегло) страница 5 от 5

6 3.2 Сапонификационен номер Осапуняващият номер се определя от количеството на титруваната HCl, като се използва следната формула: Таблица 4: Определяне на осапуняващото число ml HCl осапуняващо число [mg КОН/g мазнина] Средно молекулно тегло на мастните киселини [g/mol] Масло 3, 53 4, 3 199,5 281,20 зехтин 5,5 157,5 356, 71 трибутирин, 49 mg KOH осапунване номер g мазнина Примерно изчисление: (10 ml ml 0,5 N HCl) 28 = g определена мазнина ((10 ml 3,8 ml HCL ) x 28)/0.8g мазнина = 217mg KOH/g мазнина 217mg KOH/g мазнина x 1/56100 mg/mol = 0.004mol KOH/g мазнина = X 1/X = 258.53g/mol (средно молекулно тегло на мастните киселини ) Среден брой двойни връзки Тъй като йодът се свързва само с двойните връзки, йодният номер може да се използва директно за определяне на броя на двойните връзки. Предполагаме, че 1 mol от I 2/100g съответства на 1 mol от двойни връзки. Таблица 5: Брой двойни връзки Йодно число [g йод/100g мазнина] mol йод/100g мазнина mol двойни връзки/100g мазнина Масло 42,68 0,34 0,17 41,53 0,33 0,16 Зехтин 99,21 0,78 0 39 94,6 0,75 0,37 Примерно изчисление: страница 6 от 6

7 42,68 g йод/100 g мазнини = 21,34 g I 2/100 g мазнини 21,34 g I 2/100 g мазнини/126,9 (молекулно тегло) = 0,17 mol I 2/100 g мазнини = 0, 17 mol двойни връзки/100g мазнини 4. Съдържание на калций и фосфат Съдържание на калций: Таблица 6: Определяне на съдържанието на калций Киселинна суроватка Сирене суроватка ml EDTA 7,5 3,2 ml EDTA 7,8 3,4 ml EDTA 7,9 3,8 средна стойност 7,73 3, 47 mmol EDTA 0,08 0,03 Количеството EDTA в mmol съответства на съдържанието на Ca 2+ в mmol/5 ml суроватка. Съдържанието на Ca 2+ в mmol/l мляко може да се изчисли от средните стойности на съответните резултати. Изчисление: (mmol Ca 2+ x ml суроватка -1) x 2000, тъй като 5 ml суроватка съответства на 2.5 ml мляко. От тези резултати количеството калциеви йони в 100 ml мляко може да се изчисли, като се използва молекулното тегло на калция (40,08 g/mol). Страница 7 от 7

8 Таблица 7: Преобразуване: калций в млечна киселина суроватка сирище суроватка ммол Ca2 +/l мляко 30,93 13,87 mg/100 ml мляко 123,98 55,58 Примерно изчисление: 0,08 mmol EDTA/5 x 2000 = 30,93 mmol Ca 2 +/l мляко 30,93 mmol Ca 2+/l мляко * 40,08 (молекулно тегло)/10 = 123,98 mg/100 ml мляко Съдържание на фосфат: Следните фосфатни стойности бяха определени от калибрационната линия за нашите три проби от кисели прегради: Таблица 8: Определяне на съдържанието на фосфат с помощта на калибрационната линия Проба Extincti ml фосфат mg фосфат mg фосфат/L на 1 0,1286 1,1 0,15 136,36 2 0,1482 1,25 0,17 136,0 3 0, 1386 1,2 0,16 133,34 Коефициент на преобразуване:

8.55 4-та дискусия 1.0 Киселинни валежи При рН 4,6 може да се наблюдава утаяване на казеина. При този ph казеинът достига своята изоелектрична точка. Следователно нетният заряд на цялата молекула е неутрален при това рН, така че става неразтворим във вода и се утаява. Така определената изоелектрична точка съответства на съответното рН от литературата. 1.1 Утаяване със сирище При валежи със сирище валежите от казеин се задействат по различни начини. Лабораторията гарантира, че казеиновите мицели се унищожават и по този начин казеинът се утаява (обикновено присъства в колоидно разтворена форма в млякото.) След добавяне на 1 ml от ленения разтвор, казеинът се утаява след 210 секунди. В случай на втора проба, след добавяне на 2 ml, утаяването се проведе след 55 s, което съответства на страница 8 от 8

10 3.2 Номер на осапуняване Според нашите резултати, зехтинът съдържа най-дългите мастни киселини, трибутиринът съдържа мастни киселини, които са почти 2 пъти по-къси, докато маслото има малко по-висока стойност от трибутирина. 4. Съдържание на калций и фосфат Съдържание на калций: Съдържанието на калций в сирищната суроватка е значително по-ниско от това в киселинната суроватка. Това съвпада с резултатите от експериментална част 1.3, където успяхме да демонстрираме консумация на Ca ++ йони за активността на сирищния ензим. За разлика от това, не е необходим калций за киселинно утаяване, така че съдържанието на калций е почти същото, както в началото на експеримента. Съдържание на фосфати: С леко отклонение имаме съдържание на

136mg фосфат/l мляко може да открие. Разследването е проведено върху киселинната преграда, т.е. върху супернатанта на млякото, фракционирано чрез киселинно утаяване и центрофугиране. Страница 10 от 10

11 Използвана литература:! # "% $ & ('*), + $ .- 0/21),), + $"% $: 9 KLM # NOQPSRTJUVXWZY [\ S] ^ _ # `ba cdcea [f gjfbhjijkml fon pq r% str5uv wbijwxwzy

wj J C ƒj ƒjˆ Š Œ Ž: J Ž% Z S Ž # š œ ž. oÿ J m J J š z 5 «ªB%. % ± ²j³µ%. ¹ 0ºCºJž »2¼½¾¼ ÁÀÂCÃ À ¾.Ç5ÀE» ÃÈ ÉËÊ5ÊÌÊÇÆ¼ Í ÎCÏJÍoÐ ÑJÒmÓ ÍoÔ Õ: Ö% Øt 5ÙËÚ ÛšÑCÛxÛQÜ% ÝÞÁÛjßáàJàJâ Страница 11 от 11